探究分泌表达葡萄白藜芦醇合成酶工程菌构建及发酵条件优化

论文导读：生物降解研究进展;黑龙江八一农垦大学学报;、陈代杰-β-内酰胺抗生素生物合成基因的研究和应用;中国医药工业杂志;1993年01期、宁华,王戈林,沈萍;基因工程菌(E.ColiWY8)产黑色素的条件研究;培训与研究-湖北教育学院学报;1999年02期彭于发;张玉勋;黄大昉;张杰-抗病杀虫工程菌PT212存活和定殖的初步研究;全国生物防治学术
分泌表达葡萄白藜芦醇合成酶工程菌的构建及发酵条件优化论文相关文献勤,陈尚武;葡萄酒中的保健物质白藜芦醇[J];中外葡萄与葡萄酒;1999年03期、管锡建,马佩选,刘建华,孙狄,李光复;直接进样快速测定葡萄酒中白藜芦醇及其甙的HPLC策略[J];中外葡萄与葡萄酒;、谭琳,康由发,马兵刚,郑学勤;芪合酶基因转化番茄产生白藜芦醇的研究[J];生命科学研究;、程丽英,刘树兴;白藜芦醇研究目前状况与应用展望[J];食品研究与开发;、张宏芳,张秀琦,郑建斌,高鸿;葡萄酒中白藜芦醇的二次微分简易示波伏安法测定[J];分析测试学报;、姚宝书,齐崴;从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的研究[J];天津轻工业学院学报;1999年04期、张?,胡君萍,韩玫,周勇;HPLC法测定花生不同部位中白藜芦醇的含量[J];新疆医科大学学报;、梁荣能,莫志贤;白黎芦醇甙对脑缺血损伤的抗自由基作用[J];中国药理学通报;1996年02期、苗晓燕;于树宏;沈银柱;黄占景-利用基因转化提高虎杖毛状根中活性成分的含量[J];药学学报;、郑妍鹏,李晓东,莫金垣,谢天尧,李凤屏,李娜;非水介质毛细管电泳电导检测虎杖中的白藜芦醇[J];应用化学;【共引文献】 中国期刊全文数据库黄国强;叶冰莹;董倩;陈由强;陈如凯-白藜芦醇合酶基因在花生根中的特异表达[J];花生学报;、王晓-化瘀健脾补肾汤治疗慢性肾功能不建全46例临床观察[J];临床合理用药杂志;、张影陆,于贞,赵光鳌;葡萄与葡萄酒中的白藜芦醇[J];中外葡萄与葡萄酒;、李景明,梁学军,刘行之,毛攀锋;红葡萄酒澄清工艺中白藜芦醇的变化[J];中外葡萄与葡萄酒;、宋润刚;路文鹏;沈育杰;李昌禹;李晓红;张宝香;杨义明-真伪山葡萄酒鉴定策略的研究[J];中外葡萄与葡萄酒;、杨艳彬;李疆;杨新民;刘莉-葡萄醋发酵过程中白藜芦醇的变化[J];中外葡萄与葡萄酒;、范永;代红军;单守明;闫梅玲;周明;王振平-外源刺激诱导白藜芦醇合成的研究进展[J];中外葡萄与葡萄酒;、邹亚杰,江洁,杜连祥,路福平;碳源及氮源Trichoderma reesei306对组织型纤溶酶原激活剂生物合成的影响[J];齐齐哈尔大学学报;、戴梓茹;林美芳-花生根细胞悬浮培养的动力学模型[J];钦州学院学报;、李向阳;李月梅;唐明增;王艳芳;周红燕;朱宇同-白藜芦醇对卡介苗和脂多糖所致小鼠肝损伤的保护作用[J];中国热带医学;【二级参考文献】 中国期刊全文数据库王映红,李娜,贺文义,刘欣,李斌,林茂;高效液相色谱—核磁共振联用技术在蛇葡萄根提取混合物中的应用研究[J];波谱学杂志;、管锡建,马佩选,刘建华,孙狄,李光复;直接进样快速测定葡萄酒中白藜芦醇及其甙的HPLC策略[J];中外葡萄与葡萄酒;、谭琳,郑学勤,康由发,施江;芪合酶基因的克隆与植物表达载体的构建[J];热带作物学报;、蒋晓帆,章翔,张志文,李兵,薛菁晖,名村尚武,柳本广二,永田泉;基质金属蛋白酶抑制剂KB-R7785对鼠局灶脑缺血的保护作用[J];中华神经外科疾病研究杂志;、吕振岳,王庆华;白藜芦醇的研究进展[J];食品研究与开发;、韩雅珊,陈雷,戴蕴青;高效液相色谱法测定葡萄酒中的白藜芦醇[J];色谱;1999年04期、刘春朝;王玉春;欧阳藩-植物组织培养生产有用次生代谢产物的研究进展[J];生物技术通报;1997年05期、张建超,高新周,易德亮;虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究[J];时珍国医国药;、谢天尧,郑一宁,莫金垣,赖蓉;一种简易型毛细管电泳电导检测装置及其应用[J];分析测试学报;、陈雷,杨福全,张天佑,韩雅珊,陈尚武;虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇甙的高速逆流色谱分离提纯及其分析[J];分析测试学报;【相似文献】 中国期刊全文数据库何延青;高云霞;陈永建-工程菌生物强化处理含酚焦化废水的研究[J];工业水处理;、贺家明,赵祥颖,崔涛,伍传金;产葡萄糖异构酶工程菌工业发酵条件模拟研究[J];微生物学通报;1999年02期、宁华,王戈林,沈萍;酪氨酸酶基因工程菌所产黑色素的性质研究[J];培训与研究-湖北教育学院学报;1999年05期、;工程菌固定化细胞生产L-蛋氨酸完成中试[J];湖北化工;、;科研动态[J];上海化工;、杨基先,马放,张立秋,陆星;利用工程菌处理含油废水的可行性研究[J];东北师大学报(自然科学版);、何延青,吴永强,刘俊良,马放;处理水中微污染有机物的工程菌的研究[J];环境工程;、郑树生;孙海燕;李桂霞;马汇泉-污染土壤中农药的微生物降解研究进展[J];黑龙江八一农垦大学学报;、陈代杰-β-内酰胺抗生素生物合成基因的研究和应用[J];中国医药工业杂志;1993年01期、宁华,王戈林,沈萍;基因工程菌(E.Coli WY8)产黑色素的条件研究[J];培训与研究-湖北教育学院学报;1999年02期 彭于发;张玉勋;黄大昉;张杰-抗病杀虫工程菌PT212存活和定殖的初步研究[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年、杨自文;Thomas Curriar;钟连胜;谢天健;岳书奎-Bt MP-342菌株特性分析及工程菌构建[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年、何莉;孟冬娅-重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];、林白雪;陶勇-产唾液酸大肠杆菌代谢工程菌的构建[A];中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];、宋文丽;杨继建;张衡;乔传令-农药残留生物降解工程菌的构建、表达及其全细胞的应用[A];会论文集(第四卷)[C];、余健秀;庞义;邓日强-高毒广谱杀虫Bt工程菌T论文导读：
nY[A];全国生物防治暨第八届杀虫微生物学术研讨会论文摘要集[C];、黄明涛;刘建忠-产CoQ_(10)大肠杆菌工程菌的构建及CoQ合成途径中相关基因的过量表达[A];中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];、崔莉;谭树华;吴梧桐-重组水蛭素Ⅲ的工程菌的培养及高密度发酵[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会学术交流会论文摘要集[C];、蒋振彦;吕川;程瑛琨;孟繁清;张桂荣-阿魏酸酯酶工程菌的构建[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];、唐世文;吴珊-工程菌在废水处理中应用和研究进展[A];全国给水排水技术信息网年会论文集[C];
论文目录
摘要8-9
Abstract9-11
第1章绪论11-25

1.1白藜芦醇的概况11-12

1.1白藜芦醇的简介11

1.2白藜芦醇的分布11-12

1.2白藜芦醇的药理作用12-14

1.2.1抗菌作用12

1.2.2抗肿瘤作用12-13

1.2.3防治心血管疾病的作用13-14

1.2.4保护肝脏的作用14

1.3白藜芦醇的制取策略14-18

1.3.1从天然植物中提取14-15

1.3.2化学合成15-16

1.3.3植物细胞培养技术16-17

1.3.4芪合酶转基因技术17-18

1.4白藜芦醇合成酶的概况18-22

1.4.1芪合酶的介绍18

1.4.2白藜芦醇合成酶研究进展18-22

1.5大肠杆菌表达系统的概况22

1.6白藜芦醇的分析测定22-24

1.6.1定性检测策略22-23

1.6.2定量检测策略23-24

1.7本课题研究的目的和作用24-25

第2章材料与策略25-35

2.1材料25-27

2.

1.1植物材料25

2.

1.2菌种和质粒25

2.

1.3酶25

2.

1.4仪器设备25-26

2.

1.5实验试剂及试剂盒26-27

2.

1.6培养基27

2.2策略27-35

2.1葡萄总RNA的提取策略27-28

2.2cDNA文库的构建28

2.CR（聚合酶链式反应）28-29

2.4DNA的快速电泳检测29

2.5DNA的纯化回收29-30

2.6DNA的限制性酶切30

2.7质粒与目的片段的连接30-31

2.8大肠杆菌感受态的制备31

2.9质粒转化大肠杆菌感受态（DH5α和BL21）31

2.10菌落PCR31-32

2.11大肠杆菌的质粒提取32

2.12目的蛋白的诱导表达32-34

2.13HPLC法测定白藜芦醇的含量34-35

第3章结果与讨论35-49

3.1pET22b表达载体构建策略35-36

3.

1.1分泌表达的设计思路35

3.

1.2酶切位点的选择35

3.

1.3在pET22b表达质粒中插入RS35-36

3.2构建工程菌BL21-pET22b-RS36-41
3.

2.1设计克隆白藜芦醇合成酶基因的特异性引物36-37

3.

2.2PCR克隆RS基因37

3.

2.ET22b与RS的双酶切37-38

3.

2.4pET22b与RS的连接38

3.

2.5pET22b-RS转化克隆菌株大肠杆菌DH5α38-41

3.

2.6pET22b-RS转化表达菌株大肠杆菌BL2141

3.3对工程菌BL21-pET22b-RS中RS基因的诱导表达41-49

3.1判断是否有白藜芦醇合成酶的表达41-42

3.2判断诱导RS表达IPTG的最佳诱导浓度42-43

3.3产白藜芦醇工程菌发酵条件的优化43-49

第4章总结与展望49-51
参考文献51-60
致谢60
白藜芦醇白藜芦醇合成酶葡萄基因工程
参考文献
吴燕榕;苏云金芽孢杆菌vip3A基因及杀虫防病工程菌研究[D];福建农林大学;、段云霞;产核黄素工程菌B. subtilis PY的代谢工程研究[D];天津大学;、傅玲琳;对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28枯草工程菌的构建与VP28卵黄抗体的制备及其抗病性研究[D];浙江大学;、马林;嗜烟碱节杆菌烟碱脱氢酶性质及其在烟草加工中的应用研究[D];中国农业大学;、张建峰;东北地区秸秆降解工程菌的选育及速腐菌剂的研制[D];吉林农业大学;、张杰;对鞘翅目害虫高毒力的Bt cry基因分离克隆和工程菌的构建[D];中国农业科学院;、王乃栋;茶多酚氧化酶基因的克隆及其工程菌的构建[D];山东农业大学;、朱晨光;苏云金芽胞杆菌抗病杀虫和广谱工程菌的构建[D];华中农业大学;、史硕博;应用系统代谢工程策略改善产核黄素枯草芽孢杆菌的研究[D];天津大学;、乔俊卿;Bacillus amyloliquefaciens B3生防促生相关基因和内生质粒pBSG3的研究及高效生防工程菌的构建[D];南京农业大学; 中国硕士学位论文全文数据库吴雪云;抗生素iso-migrastatin发酵条件优化和高产机理研究[D];浙江理工大学;、刘真喜;重组hIGF-I工程菌的发酵及产物纯化的研究[D];第一军医大学;、王平章;植酸酶phyA基因转化毕赤酵母的筛选及工程菌培养基研究[D];四川农业大学;、祁艳霞;热稳定性β-半乳糖苷酶工程菌构建及其培养条件优化[D];西北农林科技大学;、申泉;利用Ⅱ型机制组成型分泌表达Harpin的生防工程菌的构建[D];山西大学;、张沛;带有ALDC基因的青岛啤酒酵母工程菌的研究[D];江南大学;、薛庆节;工程菌酯酶B1的分离纯化及固定化研究[D];山东农业大学;、王爽;表达Mn14-sod基因酵母工程菌的构建及其表达条件的研究[D];中国农业大学;、毛文杰;苏云金芽孢杆菌杀虫基因的克隆和杀虫假单胞工程菌的构建[D];河北农业大学;、王敏;构建fks1缺陷型啤酒酵母基因工程菌改良自溶性能[D];江南大学;