试议诱导成骨细胞分化过程中相关基因表达

论文导读：
摘要：目的：在骨形成这个复杂的历程中,间充质细胞分化为成骨细胞,同时分泌胞外基质,成骨细胞经过胞外基质的钙化极为进一步矿化,被包埋在骨质中而形成骨细胞。间充质细胞的成骨分化历程可简要的总结为从下几个阶段：间充质干细胞→骨祖细胞→前成骨细胞→成熟成骨细胞→骨细胞。有探讨表明,成熟的成骨细胞可分泌DMP1、ALP、PHEX、Sclerostin来调节成骨分化的整个历程。然而目前仍缺乏关于其对成骨分化历程的具体调节意义的探讨。本探讨是对MC3T3-E1细胞系进行体外成骨诱导,运用实时定量RT-PCR检测在成骨分化历程中,成骨细胞内的DMP1mRNA、ALP mRNA、HEX mRNA、 SOST mRNA表达量的变化,为进一步阐明成骨细胞在成骨分化中的调节意义提供论述基础。办法：用成骨诱导液分别对MC3T3-E1细胞诱导0天、7天、14天、21天、35天,在每个时间点观察细胞矿化结节形成状况,并用QIAGEN试剂盒提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用DMP1、ALP、PHEX、SOST引物进行实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative PCR, RFQ-PCR)实验,检测各个时间点DMP1、ALP、PHEX、SOST基因的mRNA表达状况。结果：随着MC3T3-E1细胞成骨诱导时间的增多,细胞数目增长走势显著减慢,矿化结节逐渐变大、数量逐渐增多；随着诱导时间的增多,DMP1mRNA、PHEX mRNA、SOST mRNA的表达逐渐升高,第35天达到最高,其中SOST mRNA的表达增多量最大；ALP mRNA表达逐渐降低,第35天达到最低。结论：1.在成骨诱导液意义下,成骨细胞向骨细胞分化,体现出了骨细胞的几点基因表达特性。2.成骨细胞在成骨分化历程中,细胞内与成骨意义有关基因的表达量发生明显变化,其中DMP1mRNA、PHEX mRNA、SOST mRNA的表达逐渐升高,ALP mRNA表达先基本不变后逐渐降低,这些基因的表达变化使成骨细胞对成骨历程的调节意义也发生了转变。关键词：成骨诱导论文MC3T3-E1论文骨细胞论文DMP1论文ALP论文PHEX论文SOST论文
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Abstract8-11

1. 前言11-12

2. 材料与办法12-18

2.1 主要仪器设备和试剂12-14

2.

1.1 细胞系12

2.

1.2 主要仪器设备12

2.

1.3 细胞培养试剂和材料12-13

2.

1.4 PCR用品13-14

2.2 实验办法14-18

2.1 成骨细胞MC3T3-EI培养14

2.2 成骨诱导液的配制14

2.3 MC3T3-E1细胞的成骨诱导14-15

2.4 实时定量PCR15-18

2.4.1 细胞总RNA提取15

2.4.2 RNA浓度测定15

2.4.3 逆转录反应生成cDNA15-16

2.4.4 引物的设计16

2.4.5 实时定量RT-PCR反应16-17

2.4.6 RT-PCR 结果分析17-18

2.3 统计学分析18

3. 结果18-21

3.1 MC3T3-EI细胞体外培养18

3.2 成骨诱导后细胞的生长状况18

3.3 成骨诱导液意义下,DMP1mRNA、ALP mRNA、PHEX mRNA、SOST mRNA在MC3T3-EI内的表达状况18-21

4. 讨论21-24

4.1 MC3T3-E1细胞特性21

4.2 成骨诱导液的组分和配比21-22

4.3 DMP1mRNA表达量变化的作用22-23

4.4 ALP mRNA表达量变化的作用23

4.5 PHEX mRNA表达量变化的作用23-24

4.6 SOST mRNA表达量变化的作用24

5. 结论24-25

6. 参考文献25-29

7. 附图29-34

8. 致谢34-35
9. 综述35-43
参考文献40-43
10. 临床病例报告43-47
附图44-47
学位论文评阅及答辩状况表47