对于药物新合成药物ZBH-LM-1205抗结肠癌细胞系SW1116药效学及其机制

论文导读：
摘要：结直肠癌是西方发达国家主要病死理由之一,在我国的发病率也正逐年增高。每年全世界超过80万人死于结直肠癌。死亡率居所有恶性肿瘤的第三位。外科手术是早期结肠癌的最佳治疗手段，但对于几点肿瘤复发或转移的患者而言，化学治疗目前仍是治疗该类结肠癌的最有效选择。能一定程度上降低结肠癌患者的死亡率。伊立体康为拓扑异构酶1抑制剂，现广泛运用于临床治疗结直肠癌的首选药物。但因其不良反应居多。据广泛报道,伊立体康除了伴有迟发性腹泻，恶心呕吐及胆碱综合征副意义之外，超过75%的患者可从引起三度骨髓抑制现象。为了提升药效的同时尽可能减少药物毒副意义的产生。故通过化学修饰手段，最终研发了一类新型化学合成药物ZBH-LM-120105.我们推测，此类药物在一定程度上很可能会起到一定效果。实验目的：本实验通过裸鼠体内移植瘤及细胞离体培养实验。以免疫学，分子生物学，组织化学等角度研究此类化学合成药物的细胞毒性及药效学分析。并针对其意义机制做简要的探讨研究。实验办法：离体实验：体外96孔板培养结肠癌细胞系SW1116。分别设空白对照组、单独培养基对照组、溶剂（DMSO）对照组、阳性对照（CPT）组、受试药物组ZBH-LM-1205（7个浓度），靶细胞对照组，每组4复孔。MTT法观察细胞杀伤活性变化。并拍照观察细胞形态学转变。流式细胞仪检测细胞周期变化。裸鼠移植瘤实验：建立裸鼠移植瘤模型。待造模成功后。随机分成五组：ZBH-LM-1205治疗组（60mg·kg~(-1)）.CPT11阳性对照组（60mg·kg~(-1)）。SN38阳性对照组（60mg·kg~(-1)），生理盐水组，模型组。连续瘤体局部给药6天。并两天测定一次体重变化及瘤体大小。观察抑瘤率变化极为动物一般状态状况。停药三天后，脱臼处死小鼠。取各脏器，并瘤块拍照。将瘤体切片进行VEGF,及CASPASE3免疫组织化学染色。Western blotting检测caspase3表达实验结果：1： ZBH-LM-1205治疗药物对于结肠癌细胞系SW1116细胞活性均有抑制意义，与阳性对照组相比：给药组的细胞生存率随着治疗药物浓度的增多显著呈现浓度依赖性降低。其中。治疗药物浓度500umol/L杀伤活性为59.30%（P﹤0.05）差别性有统计学作用2：细胞形态学观察，治疗药物组细胞生存率随着药物浓度的增高而呈现下降走势。与对照组相比。凋亡征象灶显著高于伊立替康阳性组。呈现浓度依赖性增高3：裸鼠移植瘤建立模型均一，造模率100%。给药五天停药两天后观察瘤快抑瘤状况，结果显示：ZBH-LM-120治疗组瘤块平均体积均小于模型组（P﹤0.05）。取瘤块称重。模型组瘤快重为（0.35±0.12）。ZBH-LM-1205治疗组瘤重为（0.17±0.05）。抑瘤率为52.30%。与阳性对照组相比。抑瘤率优于伊立替康阳性对照组（P＞0.05）。与SN38阳性组相比，有显著的抑瘤效果4：治疗组个别心肌肌浆凝聚呈深粉染和个别心肌浊肿，个别肾小管上皮细胞可见颗粒变性，肝脏组织可见个别肝细胞嗜酸性变。SN38组可见个别肝细胞嗜酸性变，胰腺外分泌部可见脂肪变性，个别心肌肌浆凝聚呈深粉染。模型组个别肾小管上皮细胞可见颗粒变性，胰腺外分泌部可见脂肪变性，个别肝细胞嗜酸性变，部分心肌肌浆凝聚呈深粉染。其余各族未见异常治疗组肿瘤组织缩小，清晰可见少量出血坏死，cpt11组未见出血坏死，SN38组可见大量出血坏死灶，其他组出血坏死少见5：肿瘤切片caspase3免疫组织化学结果显示：治疗组呈阳性表达（+++），SN38对照组呈现弱阳性表达（+）。6，肿瘤切片VEGF免疫组织化学结果显示：治疗组呈强阳性表达（+++），伊立替康对照组呈现弱阳性表达（+）。7：治疗组小鼠谷丙转氨酶（ALT）含量为9.21±1.51U，其含量对照组相比有下降走势。与模型组相比，有显著降低，实验结论：1：ZBH-LM-1205治疗药物对结肠癌细胞系SW1116有细胞毒性意义。2：ZBH-LM-1205治疗药物对移植瘤有较显著的抑瘤效果3：ZBH-LM-1205治疗药物对小鼠各个脏器无药物毒性意义，对于肝功能无损伤4：ZBH-LM-1205治疗药物亦会通过caspase通路和（或）VEGFR受体干预肿瘤细胞活性增殖及生长意义关键词：论文导读：.2.4实验分组232.2.5实验周期观察232.2.6Westernblotting23-242.2.7脏器形态学观察242.2.8免疫组化24-252.2.9血清ALT活性检测25-262.2.10主要仪器262.2.11主要试剂26-272.2.12主要试剂配置27-292.2.13统计学分析29-30第3章实验结果30-393.1体外实验30-313.1.1ZBH-LM-1205治疗药物对结肠癌细胞系SW1116杀
结肠癌论文化学药物论文凋亡论文ALT论文caspase论文VEGF论文
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Abstract7-13
前言13-14
第1章 文献综述14-21

1.1 化疗药物分类14-15

1.2 生物靶向治疗（分子靶向治疗）15-16

1.2.1 抗血管生长因子15-16

1.2.2 抗表皮生长因子16

1.3 一线治疗16-18

1.3.1 一线化疗案例的可行性16-17

1.3.2 一线生物靶向案例的可行性17-18

1.4 二线治疗18-19

1.5 三线治疗19

1.6 治疗对策19-21

第2章 实验材料与办法21-30

2.1 离体实验21-22

2.

1.1 细胞株、21

2.

1.2 溶液配制21

2.

1.3 实验分组如下21

2.

1.4 杀伤活性检测21

2.

1.5 细胞形态学观察21-22

2.

1.6 主要仪器22

2.

1.7 主要试剂22

2.

1.8 统计学作用22

2.2 体外实验22-30

2.1 实验动物22

2.2 实验材料22-23

2.3 模型建立23

2.4 实验分组23

2.5 实验周期观察23

2.6 Western blotting23-24

2.7 脏器形态学观察24

2.8 免疫组化24-25

2.9 血清 ALT 活性检测25-26

2.10 主要仪器26

2.11 主要试剂26-27

2.12 主要试剂配置27-29

2.13 统计学分析29-30

第3章 实验结果30-39

3.1 体外实验30-31

3.1.1 ZBH-LM-1205 治疗药物对结肠癌细胞系 SW1116 杀伤活性及形态学观察30-31
3.1.2 ZBH-LM-1205 治疗药物对结肠癌细胞系 SW1116 细胞形态学影响31

3.2 体内实验31-39

3.

2.1 ZBH-LM-1205 对结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响：31-32

3.

2.2 裸鼠体重观察及药物不良反应状况32-34

3.

2.3 小鼠各脏器极为肿瘤组织病理形态学观察34-36

3.2.4 ZBH-LM-1205 对裸鼠移植瘤快组织中 caspase3 表达影响36-37
3.

2.5 ZBH-LM-1205 对裸鼠移植瘤快组织中 VEGF 表达影响37

3.2.6 ZBH-LM-1205 对裸鼠移植瘤快细胞中 caspase3 蛋白表达检测37
3.

2.7 ZBH-LM-1205 对实验小鼠血清 ALT 活性检测37-39

第4章 讨论39-42
第5章 结论42-43
参考文献43-49
致谢49