研讨微管微管蛋白辅助因子A（tubulincofactorA,TBCA）在肾透明细胞癌（ccRCC）发生、进展和转移中作用

论文导读：ract7-9前言9-11第一部分TBCA真核表达载体和TBCAshRNA载体的构建和鉴定11-39材料与办法11-28结果28-36讨论36-38小结38-39第二部分肾透明细胞癌(ccRCC)组织和细胞系中TBCA和β-tubupn的mRNA及蛋白表达检测39-54材料与办法39-46结果46-51讨论51-53小结53-54第三部分TBCA在肾透明细胞癌(ccRCC)细胞中生物学功能的探
摘要：目的微管蛋白辅助因子A（tubupn cofactor A，TBCA）在调控细胞微管折叠和α/β-tubupn二聚体形成历程中起着非常重要的意义。然而，其在肿瘤发生进展中的意义尚不明确。我们试图验证TBCA在肾透明细胞癌组织和细胞系中有着差别性表达，并且进一步尝试证明TBCA可正向调控肾透明细胞癌的发生、进展和转移，为下一步发现肾透明细胞癌新的诊断和治疗靶点奠定了实验基础。办法使用qRT-PCR，免疫组化和免疫印迹（Western blot）的办法检测TBCA和β-tubupn在肾透明细胞癌和配对癌旁组织从及肾透明细胞癌细胞系和正常肾小管上皮细胞系中的表达。运用MTS法检测过表达和敲除TBCA的肾透明细胞癌细胞系的增殖状况并绘制生长曲线，同时通过平板克隆形成和软琼脂克隆形成的办法探明TBCA对肾透明细胞癌细胞增殖的意义。使用划痕实验和transwell实验揭示TBCA在影响肾透明细胞癌细胞侵袭和迁移中的意义。通过流式细胞术检测TBCA过表达和敲除后肾癌细胞的周期分布差别从及凋亡差别。使用免疫荧光的办法检测TBCA对肾透明细胞癌细胞骨架完整性的影响。进一步使用Western blotting办法验证敲除TBCA后肾癌细胞表达周期相关蛋白的差别。结果qRT-PCR，Western blot及免疫组化检测证实，TBCA在肾透明细胞癌标本和细胞株中相比其配对的正常肾癌旁组织和正常肾小管上皮细胞呈明显高表达。沉默TBCA表达可显著抑制786-O细胞和Caki-1细胞的增殖，并推动786-O细胞凋亡。TBCA表达的下调也降低了786-O细胞的侵袭和迁移能力。过表达TBCA并没有诱导出与TBCA敲除相反的生物表型。TBCA表达下调影响786-O和Caki-1细胞骨架的完整性和细胞大小，诱导细胞周期S/G2阻滞，并导致cycpneA/E和CDK2异常的表达。结论通过探讨TBCA在调节肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和转移中的意义，我们有希望证明TBCA可能成为治疗肾透明细胞癌一个崭新的分子靶点。关键词：细胞微管论文微管蛋白辅助因子A（tubupn论文cofactor论文A论文TBCA）论文肾透明细胞癌（ccRCC）论文细胞骨架论文细胞周期论文
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Abstract7-9
前言9-11
第一部分 TBCA 真核表达载体和 TBCAshRNA 载体的构建和鉴定11-39
材料与办法11-28
结果28-36
讨论36-38
小结38-39
第二部分 肾透明细胞癌(ccRCC)组织和细胞系中 TBCA 和β-tubupn 的 mRNA 及蛋白表达检测39-54
材料与办法39-46
结果46-51
讨论51-53
小结53-54
第三部分 TBCA 在肾透明细胞癌(ccRCC)细胞中生物学功能的探讨54-80
材料与办法54-61
结果61-74
讨论74-79
小结79-80
参考文献80-83
文献综述83-93
参考文献88-93
附录93-95
英文略缩词表93-95
攻读博士学位期间发表论文状况95-96
致谢96-97