探究葛根葛根总黄酮及葛根素对骨髓基质细胞成骨分化及成脂分化影响科技

论文导读：
摘要：本文从小鼠骨髓基质细胞为模型，采取MTT法、碱性磷酸酶活性和油红O染色及定量分析、茜素红染色剂定量分析等办法在细胞水平上探讨了大豆苷元、葛根总黄酮及葛根素对小鼠骨髓基质细胞增殖、成骨分化、体外矿化及成脂分化的影响，并用荧光定量PCR和Westernblot等办法,考察上面陈述的药物对骨髓基质细胞成骨和成脂分化途径中关键靶基因的表达的影响。探讨结果表明：1.细胞水平上：大豆苷元、葛根总黄酮及葛根素可从推动小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化，抑制其向脂肪细胞方向的成脂分化；2.分子水平上：大豆苷元、葛根总黄酮及葛根素上调成骨分化关键转录因子Runx2的表达，抑制成脂关键转录因子PPARγ2的表达，与细胞水平实验结果相互验证；3.大豆苷元、葛根总黄酮及葛根素可通过调控ERα表达影响小鼠骨髓基质细胞成骨分化和成脂分化。综上所述，大豆苷元、葛根总黄酮及葛根素可从双向调节骨髓基质细胞的成骨和成脂分化：一方面通过增多成骨细胞的数量而直接推动骨形成，另一方面通过减少脂肪细胞的数量而间接推动骨髓基质细胞成骨分化并降低脂肪细胞对破骨细胞的推动意义,以而在整体水平上使骨量增多，从达到防治骨质疏松的意义，Runx-2、PPARγ2和ERα是大豆苷元、葛根总黄酮及葛根素发挥意义的可能靶点。关键词：葛根总黄酮论文骨髓基质细胞论文成骨分化论文成脂分化论文基因表达论文
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Abstract5-9
第1章 绪论9-24

1.1 骨质疏松的病理机制9-10

1.2 葛根的探讨发展10-22

1.2.1 葛根概述10-12

1.2.2 化学成分的探讨发展12-18

1.2.3 药理活性的探讨发展18-22

1.3 立题依据22-24

第2章 葛根总黄酮及葛根素对骨髓基质细胞成骨和成脂分化极为功能的影响24-38

2.1 材料和试剂24-25

2.

1.1 实验动物24

2.

1.2 实验试剂24-25

2.

1.3 实验仪器25

2.2 实验办法25-27

2.1 葛根总黄酮的的制备25

2.2 原代MSCs的分离和培养25

2.3 原代MSCs增殖实验25-26

2.4 碱性磷酸酶（ALP）活性测定26

2.5 矿化结节定性及定量分析26

2.6 油红O定性及定量分析26

2.7 统计分析26-27

2.3 实验结果27-36

2.3.1 葛根总黄酮及葛根素对MSCs增殖的影响27-29

2.3.2 葛根总黄酮及葛根素对MSCs成骨分化早期ALP活性的影响29-31

2.3.3 葛根总黄酮及葛根素对MSCs成骨分化晚期矿化功能的影响31-33

2.3.4 葛根总黄酮及葛根素对MSCs成脂分化的影响33-36

2.4 结果讨论36-38

第3章 葛根总黄酮及葛根素对MSCs成骨及成脂分化历程中重要基因表达的影响38-52

3.1 实验材料38-39

3.

1.1 实验动物38

3.

1.2 实验试剂38

3.

1.3 实验仪器38-39

3.

1.4 实验样品39

3.2 实验办法39-44
3.

2.1 RNA的提取39

3.

2.2 First-strandcDNA合成39-40

3.

2.3 实时荧光定量PCR反应（Q-PCR）40-41

3.

2.4 蛋白表达分析41-44

3.

2.5 统计分析44

3.3 实验结果44-50

3.1 葛根总黄酮及葛根素对Runx-2基因表达的影响44-46

3.2 葛根总黄酮及葛根素对PPARγ2基因表达的影响46-48

3.3 葛根总黄酮及葛根素对ER-α基因表达的影响48-49

3.4 葛根素对Runx-2和PPARγ2蛋白表达的影响49-50

3.4 实验结果讨论50-52

第4章 结论52-54
4.1. 在细胞水平体系地探讨了葛根总黄酮、葛根素、大豆苷元对MSCs成脂和成骨分化的影响52-53
4.2. 在分子水平深入探讨了葛根总黄酮等对成脂和成骨分化历程中关键转录因子表达的影响53
4.3 在基因和蛋白水平探讨了葛根总黄酮等对MSCs分化中ERα表达的影响53-54
参考文献54-60
致谢60