试论癌细胞两栖类抗菌肽Temporin-1CEa对乳腺癌细胞作用机制

论文导读：讨：通过乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）法和AnnexinV/PI双染法检测了Temporin-1CEa诱导乳腺癌细胞死亡的方式。在探讨Temporin-1CEa对癌细胞膜的作用时，分别采取荧光探针DiBA(3)和CalceinAm/EthD-1对肿瘤细胞的膜电位，膜损伤程度及膜通透性进行考察；并通过荧光探针Rhodamine12

3、Fluo3-AM，浅析Temporin-1CEa作用于

摘要：抗菌肽是天然免疫中的一种重要介质，是生物体在抵御病原微生物的防御反应历程中所产生的一类具有抗菌抗癌等生物活性的多肽。本论文中，Temporin-1CEa是以中国林蛙皮肤分泌物中提取出来的抗菌肽，由17个氨基酸组成，分子净电荷为+3，呈两亲性的α-螺旋结构，具有较好的抗癌活性。本论文主要探讨了抗菌肽Temporin-1CEa对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、Bcap-37细胞的生物学效应和可能的作用机制。为此，我们首先通过MTT策略测定了Temporin-1CEa对包括3种乳腺癌在内的13种肿瘤细胞增殖的抑制作用；然后选取人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和Bcap-37细胞进行作用机制的探讨：通过乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）法和Annexin V/PI双染法检测了Temporin-1CEa诱导乳腺癌细胞死亡的方式。在探讨Temporin-1CEa对癌细胞膜的作用时，分别采取荧光探针DiBA(3)和CalceinAm/EthD-1对肿瘤细胞的膜电位，膜损伤程度及膜通透性进行考察；并通过荧光探针Rhodamine123、Fluo3-AM，浅析Temporin-1CEa作用于乳腺癌细胞后线粒体膜电位以及细胞内钙离子浓度的的变化情况。结果显示：两栖类皮肤活性肽Temporin-1CEa分别作用于13种肿瘤细胞1h、6h、24h、48h后，大部分癌细胞在1h左右开始出现死亡，并与剂量呈正相关性，而正常的细胞则没有出现显著的死亡和生长抑制现象，其中除对人黑色素瘤A375细胞外，Temporin-1CEa对人乳腺癌细胞的作用较为敏感。由此，本论文主要选取3种不同的乳腺癌细胞作为进一步的探讨对象，探讨Temporin-1CEa的作用机制。进一步探讨结果显示，Temporin-1CEa以生物膜为主要作用靶点，首先使乳腺癌细胞细胞膜的膜电位升高，通透性增加。其进入细胞后，该肽可以使线粒体膜电位下降，损伤线粒体膜，使线粒体无法正常供给细胞能量；此外，细胞内游离钙离子浓度升高也可能参与了Temporin-1CEa引起的乳腺癌细胞毒性反应。关键词：抗菌肽论文乳腺癌细胞论文抗癌机制论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。论文导读：1第一章绪论11-221.1抗菌肽探讨概况11-131.1.1抗菌肽的来源111.1.2抗菌肽的分类11-121.1.3抗菌肽的理化性质12-131.2两栖类抗菌肽的探讨131.3抗菌肽的生物学活性13-161.3.1广谱抗菌性13-141.3.2抗病毒作用141.3.3推动伤口愈合141.3.4抗寄生虫作用141.3.5抗肿瘤作用14-151.3.6其他生物学活性15-161.4抗菌肽的抗
摘要4-5
Abstract5-10
引言10-11
第一章 绪论11-22

1.1 抗菌肽探讨概况11-13

1.1 抗菌肽的来源11

1.2 抗菌肽的分类11-12

1.3 抗菌肽的理化性质12-13

1.2 两栖类抗菌肽的探讨13

1.3 抗菌肽的生物学活性13-16

1.3.1 广谱抗菌性13-14

1.3.2 抗病毒作用14

1.3.3 推动伤口愈合14

1.3.4 抗寄生虫作用14

1.3.5 抗肿瘤作用14-15

1.3.6 其他生物学活性15-16

1.4 抗菌肽的抗肿瘤作用机制16-20

1.4.1 细胞膜攻击作用16-18

1.4.2 对癌细胞骨架的断裂作用18-19

1.4.3 线粒体作用19

1.4.4 诱导凋亡作用19

1.4.5 作用于细胞核染色体 DNA19-20

1.4.6 免疫效应20

1.5 本探讨的目的和作用20-22

第二章 抗菌肽 Temporin-1CEa 对正常细胞及多种肿瘤细胞的作用影响22-31

2.1 材料22-23

2.

1.1 实验试剂22

2.

1.2 细胞株22

2.

1.3 实验仪器22-23

2.2 策略23-25

2.1 实验原理23

2.2 细胞培养23

2.3 细胞生长抑制实验-MTT 比色法23-24

2.4 细胞毒性检测实验-LDH 法24-25

2.3 结果25-29

2.3.1 抗菌肽 Temporin-1CEa 对正常细胞及多种肿瘤细胞的生长抑制作用25-29

2.3.2 抗菌肽 Temporin-1CEa 对正常细胞的细胞毒作用29

2.4 讨论29-31

第三章 抗菌肽 Temporin-1CEa 诱导三种乳腺癌细胞死亡方式的探讨31-38

3.1 材料31

3.

1.1 实验试剂31

3.

1.2 细胞株31

3.

1.3 实验仪器31

3.2 策略31-32
3.

2.1 乳酸脱氢酶检测31-32

3.

2.2 Annexin V-FITC/PI 双染检测32

3.3 结果32-36

3.1 Temporin-1CEa 对乳腺癌细胞的细胞毒作用32-34

3.2 Temporin-1CEa 对乳腺癌细胞死亡的方式34-36

3.4 讨论36-38

第四章 抗菌肽 Temporin-1CEa 对三种乳腺癌细胞细胞膜作用的探讨38-45

4.1 材料38

4.

1.1 实验试剂38

4.

1.2 细胞株38

4.1论文导读：第五章抗菌肽Temporin-1CEa对三种乳腺癌细胞线粒体和细胞内i的影响45-555.1材料455.1.1实验试剂455.1.2细胞株455.1.3实验仪器455.2策略45-465.2.1线粒体膜电位检测455.2.2细胞内i的检测45-465.3结果46-535.3.1Temporin-1CEa对线粒体膜电位的影响46-495.3.2Temporin-1CEa对细胞内i的影响49-535.4讨论53-5
.3 实验仪器38

4.2 策略38-39

4.

2.1 细胞跨膜电位检测38

4.

2.2 细胞膜通透性检测38-39

4.3 结果39-43
4.

3.1 Temporin-1CEa 对细胞跨膜电位的影响39-41

4.

3.2 Temporin-1CEa 对细胞膜通透性的影响41-43

4.4 讨论43-45
第五章 抗菌肽 Temporin-1CEa 对三种乳腺癌细胞线粒体和细胞内[Ca~(2+)]i 的影响45-55

5.1 材料45

5.

1.1 实验试剂45

5.

1.2 细胞株45

5.

1.3 实验仪器45

5.2 策略45-46
5.

2.1 线粒体膜电位检测45

5.

2.2 细胞内[Ca~(2+)]i 的检测45-46

5.3 结果46-53
5.

3.1 Temporin-1CEa 对线粒体膜电位的影响46-49

5.

3.2 Temporin-1CEa 对细胞内[Ca~(2+)]i 的影响49-53

5.4 讨论53-55
结论55-56
参考文献56-62
攻读硕士学位期间发表学术论文情况62-63
致谢63