试议包膜人免疫缺陷病毒包膜蛋白在母婴传播过程中作用

论文导读：-261.1.3慢病毒的分子生物学特点26-27第二节人类免疫缺陷病毒27-411.

2.1HIV介绍27-291.2HIV-1病毒颗粒的结123下一页

摘要：I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)母婴传播(MTCT)的现象在资源匮乏的地区仍然是个很严重的不足。在医疗并不发达的非洲撒哈拉以南地区尤为突出，15岁以下感染HIV-1的儿童超过90%都生活在这里，并且新感染HIV-1的患儿超过95%都在这里。此外，在这个地区C亚型HIV-1最为流行，其感染率已经超过60%。由于目前尚未有着预防MTCT的有效疫苗及这些进展中国家的抗病物并不普及，由此探究MTCT历程中优先传播病毒的生物学特点对找到阻断MTCT的有效对策具有重要作用。我们前期探讨表明在慢性感染母婴对中传播到婴儿的病毒和母亲的病毒相比具有更高的复制适应性，并且这个特点是由HIV-1包膜糖蛋白(Env)的V1-V5区决定的。为了确定慢性感染母婴对中传播病毒的高复制适应性是否由Env V1-V5区诱导了更高的病毒进入效率导致的，利用两种不同的探讨Env介导细胞间融合的策略，对5对慢性感染和2对急性感染母婴对中母亲和婴儿病毒Env V1-V5区诱导细胞融合的能力进行了比较浅析。结果表明，在1对慢性感染母婴对中发现了婴儿病毒Env V1-V5区具有更高的介导细胞融合的能力并且是由V4V5区决定的，而在其他母婴对中未得到一致的走势和显著的差别。这些结果表明在HIV-1母婴传播历程中传播病毒的复制适应性和其Env V1-V5区诱导的进入效率并无显著的正相关性。母婴传播的方式和时间也可能参与影响病毒复制适应性的选择。对感染HIV-1的孕妇及新生儿进行抗病物的治疗与预防能够有效的降低HIV-1的MTCT，但是随之带来的病毒耐药性不足也引起了人们的关注。小分子的CCR5拮抗剂代表了一类新的治疗HIV-1感染的药物。Mariroc是这类药物中唯一被FDA批准的多运用于被R5嗜性病毒感染但对多种抗病物出现耐药性的患者治疗中，并于最近批准进入一线临床药物。虽然病毒中有着的mariroc原发性耐药位点会影响mariroc将来在阻断MTCT中的临床运用，但对于mariroc原发性耐药位点在母婴传播样本中的流行及传播鲜有报道。为了评价mariroc原发性耐药位点在本论文母婴传播样本中的流行及传播，并且浅析各母婴对Env对mariroc的敏感性，对6对慢性感染和3对急性感染母婴对Env进行了序列浅析检测mariroc原发性耐药位点的流行及传播，同时也浅析了已有报道的另一种小分子CCR5拮抗剂-vicriviroc的原发性耐药位点。将其中4对慢性和2对急性感染母婴对Env构建到病毒骨架中形成重组病毒评价其对mariroc的敏感性。结果表明Env中A316T突变（赋予对mariroc的部分抗性）、T307I和R315Q突变（赋予对vicriviroc的部分抗性）在各母婴对母亲和婴儿病毒准种群中流行率很高，意味着母亲病毒准种群中的原发性耐药位点可以随母婴传播历程传播到婴儿。但传播的方式在急性感染和慢性感染样本中是有区别的，在急性感染样本中，在母亲中有着的突变位点趋于以复制的形式直接以母亲传到婴儿，而在慢性感染样本中，一些低频率的突变位点在母婴传播历程中丢失，只有高频率（接近100%）的突变位点才会被传播下来。此外，样本中母亲和婴儿病毒对mariroc均敏感，但慢性感染样本中母亲和婴儿病毒比急性感染样本中母亲和婴儿病毒对marirocc更为敏感。这些结果表明在母婴传播中原发性耐药位点的传播方式及样本对mariroc的敏感性依赖于样本的感染类型，同时mariroc在临床运用上对急性感染母婴对群体的运用剂量要高于慢性感染母婴对。关键词：I型人免疫缺陷病毒论文母婴传播论文C亚型论文包膜蛋白论文mariroc论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要5-9
Abstract9-23
第一章 引言23-105
第一节 慢病毒23-27

1.1 慢病毒的分类23-25

1.2 慢病毒概况25-26

1.3 慢病毒的分子生物学特点26-27

第二节 人类免疫缺陷病毒27-41

1.2.1 HIV 介绍27-29

1.2.2 HIV-1 病毒颗粒的结论文导读：1-431.3.2HIV-1母婴传播的途径43-481.3.2.1宫内传播44-461.3.2.2分娩时传播46-471.3.2.3哺乳传播47-481.3.3母婴传播的影响因素48-511.3.3.1母亲的先天性免疫48-491.3.3.2母亲体内中和抗体和T细胞反应49-501.3.3.3婴儿先天免疫、体液免疫及细胞免疫50-51第四节HIV-1的复制适应性51-641.

4.1HIV-1的复制适应性的

构29-32

1.2.2.1 包膜29-31

1.2.2.2 衣壳31

1.2.2.3 病毒核心31-32

1.2.3 HIV-1 的基因组结构32-35

1.2.4 HIV-1 的基因亚型、嗜性分类35-38

1.2.5 HIV-1 的生活周期38-41

第三节 HIV-1 的母婴传播41-51

1.3.1 HIV-1 母婴传播的流行走势41-43

1.3.2 HIV-1 母婴传播的途径43-48

1.3.2.1 宫内传播44-46

1.3.2.2 分娩时传播46-47

1.3.2.3 哺乳传播47-48

1.3.3 母婴传播的影响因素48-51

1.3.3.1 母亲的先天性免疫48-49

1.3.3.2 母亲体内中和抗体和 T 细胞反应49-50

1.3.3.3 婴儿先天免疫、体液免疫及细胞免疫50-51

第四节 HIV-1 的复制适应性51-64

1.4.1 HIV-1 的复制适应性的定义51-53

1.4.2 HIV-1 复制适应性的定量53-60

1.4.3 HIV-1 复制适应性在母婴传播中的作用60-64

第五节 HIV-1 的进入，抑制剂及耐药性64-99

1.5.1 HIV-1 的表面糖蛋白和进入64-86

1.5.1 HIV-1 与宿主细胞的 CD4 受体结合64-66

1.5.2 与辅助受体的相互作用66-71

1.5.3 膜融合71-75

1.5.4 Env 的合成，运输以及组装到毒粒75-80

1.5.5 四跨膜蛋白家族对 HIV-1 Env 介导膜融合的调节作用80-86

1.5.2 HIV-1 进入抑制剂86-92

1.5.2.1 HIV-1 感染者的抗病毒疗法86-87

1.5.2.2 HIV-1 进入抑制剂87-90

1.5.2.3 小分子的 CCR5 拮抗剂90-92

1.5.3 辅助受体抑制剂的耐药性92-99

1.5.3.1 辅助受体嗜性的切换93

1.5.3.2 竞争抑制模型93-95

1.5.3.3 非竞争抑制模型95-99

第六节 本探讨的目的和作用99-105
第二章 材料与策略105-125
第一节 实验材料105-111
2.

1.1 细胞105

2.

1.2 菌株105-106

2.

1.3 质粒106-110

2.

1.3.1 本论文构建的质粒106-109

2.

1.3.2 本论文用到的其它质粒109-110

2.

1.4 主要试剂110-111

2.

1.4.1 酶类110-111

2.

1.4.2 其它试剂111

第二节 实验策略111-125

2.1 质粒 DNA 提取111

2.2 DNA 的酶切及连接111

2.3 E.cop 感受态细胞的制备及转化111

2.2.4 聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR)111-113

2.4.1 引物的设计及合成111-112

2.4.2 扩增反应112-113

2.5 细胞相关实验113-114

2.5.1 细胞培养113

2.5.2 细胞转染（PEI 转染法）113-114

2.6 细胞融合相关实验114-117

2.6.1 免疫荧光染料标记的细胞融合检测法114-116

2.6.2 报告基因法检测细胞间融合116-117

2.7 萤火虫荧光素酶活性测定（Luciferase Assay）117-118

2.8 人外周血单核淋巴细胞(PBMC)的分离和培养118-119

2.2.9 人外周血单核淋巴细胞(PBMC)中 CD4+T 淋巴细胞的分离和培养119-121
2.2.10 人外周血单核淋巴细胞(PBMC)中巨噬细胞(Macrophage)的分离和培养121-122
2.2.11 Western blotting 检测各母婴对 Env gp120 的表达122-123
2.2.12 用流式细胞术浅析各母婴对 Env gp120 在细胞膜上的表达123-125
第三章 结果与浅析125-162
第一节 HIV-1 感染母婴对 V1-V5 区嵌合 ENV的融合功能浅析125-141
3.

1.1 HIV-1 感染母婴对的临床特点介绍125-129

3.

1.2 检测 Env 介导细胞间融合功能系统的建立129-135

3.

1.2.1 通过荧光染料示踪直接检测 Env 介导细胞间融合129-134

3.1.2.2 通过报告基因的表达间接检测 Env 介导的细胞间融合134-1论文导读：669中ENV蛋白介导融合的能力141-1553.2.1HIV-1慢性感染母婴对2669中Env介导与不同类型靶细胞融合的功能浅析141-1433.2.2HIV-1感染母婴对2669中Env的融合动力学143-1443.2.3检测HIV-1感染母婴对2669中Env在效应细胞内部和表面的表达水平144-1473.2.4母婴对2669中Env的V4V5决定了Env介导细胞融
35
3.

1.3 HIV-1 感染母婴对 Env 融合功能的检测135-141

第二节 浅析 HIV-1 慢性感染母婴对 2669 中 ENV蛋白介导融合的能力141-155
3.2.1 HIV-1 慢性感染母婴对 2669 中 Env 介导与不同类型靶细胞融合的功能浅析141-143
3.

2.2 HIV-1 感染母婴对 2669 中 Env 的融合动力学143-144

3.2.3 检测 HIV-1 感染母婴对 2669 中 Env 在效应细胞内部和表面的表达水平144-147
3.2.4 母婴对 2669 中 Env 的 V4V5 决定了 Env 介导细胞融合的能力77147-150
3.2.5 宿主细胞表面因子-四跨膜蛋白家族成员对 Env 介导融合功能的影响150-155
第三节 HIV-1 进入抑制剂的原发性耐药位点在母婴群体中的流行和传播155-159
3.3.1 Mariroc 和 vicriviroc 的原发性耐药位点在母亲准种中的流行性浅析155-157
3.3.2 Mariroc 和 vicriviroc 的原发性耐药位点在婴儿准种中的流行性浅析157-159
第四节 浅析 HIV-1 感染母婴对 ENV对 MARIROC的敏感性159-162
3.4.1 HIV-1 感染母婴对 Env 对 mariroc 的敏感性曲线的建立159-160
3.4.2 浅析比较mariroc对HIV-1感染母婴对病毒复制的抑制作用160-162
第四章 讨论162-179
第一节 HIV-1 ENV在母婴传播历程中的作用162-166
第二节 独特的 HIV-1 感染母婴对 2669 ENV的功能浅析166-169
第三节 ENV中原发性耐药位点在HIV-1感染母婴样本中的流行及传播169-172
第四节 HIV-1 母婴传播样本的 ENV对 MARIROC的敏感性浅析172-179
第五章 结论与展望179-184
第一节 结论179-182
第二节 展望182-184
参考文献184-234
致谢234-237
附录 英文缩写237-239
个人简历239-240
在学期间发表的学术论文与探讨成果240-244