研究核苷酸抗乙肝病毒候选药MC78新酯早期毒性结论
最后更新时间：2024-03-12
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论文导读：次，体外对MC78新酯进行细胞毒性试验得到结果如下：MC78新酯对HepG2细胞和HK-2细胞形态的影响，对照组细胞生长状态旺盛，伸展性良好，而给药组发生了不同程度的细胞皱缩，细胞空泡化，死细胞增加，而且呈现剂量效应联系。通过MTT试验测定MC78新酯等对细胞增殖抑制的结果如下：MC78新酯和MC78能够显著抑制细胞的增殖，其IC50
摘要：乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病。它是一种严重危害人类健康的疾病，具有发病率高，人群分布广泛，难治愈易复发，易产生耐药性等特点。目前，乙型肝炎的主要治疗手段为药物治疗，已有的治疗药物包括天然多糖类活性物质、干扰素（IFN）α及核苷（酸）类似物（NUCs）三大类。其中运用最多的为核苷（酸）类似物（NUCs）。现有的抗乙肝病核苷（酸）类似物有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替诺福韦酯、克拉夫定等。拉米夫定需要长期给药，易产生耐药性；阿德福韦酯最常用的抗乙肝病物，无需细胞内磷酸化，与拉米夫定没有交叉耐药性，而且自身不易产生耐药性；但是具有剂量限制性的肾脏毒性；替诺福韦酯是目前最有效的抗乙肝病物，在我国有专利保护，尚未在中国上市；生物利用度低，剂量较大，成本较高。阿德福韦酯及替诺福韦酯均为活泼酯前药，进入体内迅速在血浆中水解，化学稳定性较差。阿米福韦酯（Alamifovir，MC78）属于新化学结构类型的核苷酸类抗乙肝病毒新药，在化学结构上，与目前已知的核苷类抗乙肝药物不同，在核苷碱基母核的6位为苯硫基取代。在抗乙肝病毒方面，该化学物对HBV具有高度选择性的抑制作用，而对HIV、HSV等其它逆转录病毒没有作用，显示出独特的药理学性质；其次，它对抗拉米夫定的HBV耐药株（YMDD变异）有效。最后，对肝脏具有高度选择性的分布，能特异性直达靶器官，发挥药理学作用。目前MC78已进入Ⅱ期临床。MC78新酯为本所开发的MC78类似物，其抗病毒活性是MC78的100多倍。在药物代谢方面，MC78新酯在体内不形成毒性代谢中间产物，而是完全水解为核苷酸形式，避开了代谢中间产物产生的毒性。另外，通过形成富马酸盐，提升了药物的稳定性和水溶性。MC78新酯在药理、药代、药剂以及药效方面均优于MC78，那么其毒性是否也低于MC78？是否更安全？是否能满足毒理学的成药条件？此即本课题所需回答的不足。具体探讨内容及结果如下：首先，采取Derek软件进行计算毒理学预测浅析，结果发现在致癌性、抑制胆碱酯酶、神经毒性、急性中毒性肾病、皮肤致敏、白细胞和免疫累积毒性、染色体损伤毒性方面只在代谢中间体中预测可能发生，而MC78，MC78新酯则不体现出来；在肝毒性方面，MC78，MC78新酯在大鼠、犬、人类中都体现出来，而代谢中间体预测则提示没有肝毒性。其次，体外对MC78新酯进行细胞毒性试验得到结果如下：MC78新酯对HepG2细胞和HK-2细胞形态的影响，对照组细胞生长状态旺盛，伸展性良好，而给药组发生了不同程度的细胞皱缩，细胞空泡化，死细胞增加，而且呈现剂量效应联系。通过MTT试验测定MC78新酯等对细胞增殖抑制的结果如下：MC78新酯和MC78能够显著抑制细胞的增殖，其IC50值分别为：MC78新酯113.68μM，MC78为638.20μM；MC78的活性产物PMPA以及毒性代谢中间体单酯都能够抑制细胞的增殖，但抑制率未达到50%。由此，毒性大小顺序为MC78新酯＞MC78＞单酯＞PMPA。其三，利用Ames波动试验探讨MC78新酯的致突变性，结果如下：采取环磷酰胺和叠氮钠分别作为加S9与不加S9条件下的阳性对照物，结果与溶剂对照组相比均有显著性差别，证明本实验系统真实可信。在加与不加S9的情况下，MC78及MC78新酯阳性孔数与对照组相比均没有显著性差别，提示MC78及MC78新酯均对TA100菌株无致突变性。其四，利用上下法进行体内急性毒性探讨，结果如下：阿德福韦酯经口染毒大鼠LD_50=1296mg/kg(♀)，95%CI(760~2000mg/kg)；MC78新酯经口染毒大鼠LD_502000mg/kg(♀)；根据急性毒性分级标准，均属于低毒物质，且二者比较，MC78新酯的LD50大于阿德福韦酯，说明MC78新酯的急性毒性要低于阿德福韦酯。染毒后出现的毒性体现有：精神萎靡，竖毛；眼角分泌物，肛周污秽，腹泻，角弓反张。最后，选择大鼠灌胃MC78新酯14天重复染毒毒性试验来观察MC78新酯的重复给药毒性特点。动物随机分为溶剂对照组、MC78新酯低剂量35mg/kg组、中剂论文导读：较好的一致性。6.MC78新酯的毒性相当于或优于MC78，基本满足毒理学的成药条件。关键词：核苷酸类似物论文早期毒性筛选论文计算毒理学论文MC78新酯论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。缩略词对照表4-5摘要5-8ABS
量70mg/kg组、高剂量140mg/kg组和阳性对照阿德福韦100mg/kg组。结果发现：随着剂量升高，MC78新酯动物的体重呈现逐渐下降走势，但各剂量组与对照组相比没有显著性差别；以整个实验期间观察来看，低剂量组摄食量略高于对照组，中高剂量组摄食量与对照组相比则呈下降走势，但均无统计学差别，总体看来，MC78新酯对大鼠摄食量没有显著的影响。MC78新酯低、中、高三个剂量组随着剂量升高，肝脏系数呈下降走势，而阿德福韦酯阳性对照组的肝脏系数略高于溶剂对照组，但各给药组间与对照组均无显著性差别。MC78新酯高剂量组以及阳性对照组的肾脏系数高于对照组，差别具有统计学作用。病理组织学检查结果：MC78新酯低剂量35mg/kg组，中剂量70mg/kg组，高剂量140mg/kg组，均示肾脏结构正常；阿德福韦100mg/kg阳性对照组，示肾近曲小管上皮细胞有轻度损伤。低剂量组35mg/kg，中剂量组70mg/kg示肝细胞和肝组织结构正常；高剂量组140mg/kg示肝细胞肿胀等轻度损伤;阳性对照组阿德福韦100mg/kg示肝组织结构正常.低剂量组35mg/kg，中剂量组70mg/kg，高剂量组140mg/kg示小肠结构正常；阳性对照组阿德福韦100mg/kg示小肠粘膜层萎缩和小肠细胞损伤.淋巴组织在各剂量组结构均显示正常。综合以上探讨结果，得出以下结论：1.虽然MC78新酯急性毒性小，但高剂量组长期给药后显示一定的肝毒性；2.采取敏感特异的的生物标志物检测发现，MC78新酯可能有一定的肾毒性；3.对照药Adefovir具有肾毒性，与国外文献报道一致，说明此试验系统可信；4.MC78和MC78新酯在有无S9活化条件下均无致突变性；5.体内外实验结果与毒性预测软件的预测结果有较好的一致性。6.MC78新酯的毒性相当于或优于MC78，基本满足毒理学的成药条件。关键词：核苷酸类似物论文早期毒性筛选论文计算毒理学论文MC78新酯论文
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摘要5-8
ABSTRACT8-11
前言11-18
参考文献16-18
第一章 MC78新酯的计算毒理学预测18-22
材料与策略18-19
结果19-20
讨论20-21
参考文献21-22
第二章 MC78新酯的早期毒性筛选22-37
第一节 MC78新酯的基本细胞毒性23-26
材料与策略23-24
结果24-26
第二节 MC78新酯的致突变性探讨26-32
材料与策略26-31
结果31-32
第三节 MC78新酯的急性毒性上下法探讨32-35
材料与策略32-34
结果34-35
讨论35-37
第三章 MC78新酯的亚急性毒性探讨37-52
材料与策略38-41
结果41-50
讨论50-52
结论52-53
致谢53-54
综述54-67
参考文献64-67
发表及撰写文章67-73
摘要：乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病。它是一种严重危害人类健康的疾病，具有发病率高，人群分布广泛，难治愈易复发，易产生耐药性等特点。目前，乙型肝炎的主要治疗手段为药物治疗，已有的治疗药物包括天然多糖类活性物质、干扰素（IFN）α及核苷（酸）类似物（NUCs）三大类。其中运用最多的为核苷（酸）类似物（NUCs）。现有的抗乙肝病核苷（酸）类似物有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替诺福韦酯、克拉夫定等。拉米夫定需要长期给药，易产生耐药性；阿德福韦酯最常用的抗乙肝病物，无需细胞内磷酸化，与拉米夫定没有交叉耐药性，而且自身不易产生耐药性；但是具有剂量限制性的肾脏毒性；替诺福韦酯是目前最有效的抗乙肝病物，在我国有专利保护，尚未在中国上市；生物利用度低，剂量较大，成本较高。阿德福韦酯及替诺福韦酯均为活泼酯前药，进入体内迅速在血浆中水解，化学稳定性较差。阿米福韦酯（Alamifovir，MC78）属于新化学结构类型的核苷酸类抗乙肝病毒新药，在化学结构上，与目前已知的核苷类抗乙肝药物不同，在核苷碱基母核的6位为苯硫基取代。在抗乙肝病毒方面，该化学物对HBV具有高度选择性的抑制作用，而对HIV、HSV等其它逆转录病毒没有作用，显示出独特的药理学性质；其次，它对抗拉米夫定的HBV耐药株（YMDD变异）有效。最后，对肝脏具有高度选择性的分布，能特异性直达靶器官，发挥药理学作用。目前MC78已进入Ⅱ期临床。MC78新酯为本所开发的MC78类似物，其抗病毒活性是MC78的100多倍。在药物代谢方面，MC78新酯在体内不形成毒性代谢中间产物，而是完全水解为核苷酸形式，避开了代谢中间产物产生的毒性。另外，通过形成富马酸盐，提升了药物的稳定性和水溶性。MC78新酯在药理、药代、药剂以及药效方面均优于MC78，那么其毒性是否也低于MC78？是否更安全？是否能满足毒理学的成药条件？此即本课题所需回答的不足。具体探讨内容及结果如下：首先，采取Derek软件进行计算毒理学预测浅析，结果发现在致癌性、抑制胆碱酯酶、神经毒性、急性中毒性肾病、皮肤致敏、白细胞和免疫累积毒性、染色体损伤毒性方面只在代谢中间体中预测可能发生，而MC78，MC78新酯则不体现出来；在肝毒性方面，MC78，MC78新酯在大鼠、犬、人类中都体现出来，而代谢中间体预测则提示没有肝毒性。其次，体外对MC78新酯进行细胞毒性试验得到结果如下：MC78新酯对HepG2细胞和HK-2细胞形态的影响，对照组细胞生长状态旺盛，伸展性良好，而给药组发生了不同程度的细胞皱缩，细胞空泡化，死细胞增加，而且呈现剂量效应联系。通过MTT试验测定MC78新酯等对细胞增殖抑制的结果如下：MC78新酯和MC78能够显著抑制细胞的增殖，其IC50值分别为：MC78新酯113.68μM，MC78为638.20μM；MC78的活性产物PMPA以及毒性代谢中间体单酯都能够抑制细胞的增殖，但抑制率未达到50%。由此，毒性大小顺序为MC78新酯＞MC78＞单酯＞PMPA。其三，利用Ames波动试验探讨MC78新酯的致突变性，结果如下：采取环磷酰胺和叠氮钠分别作为加S9与不加S9条件下的阳性对照物，结果与溶剂对照组相比均有显著性差别，证明本实验系统真实可信。在加与不加S9的情况下，MC78及MC78新酯阳性孔数与对照组相比均没有显著性差别，提示MC78及MC78新酯均对TA100菌株无致突变性。其四，利用上下法进行体内急性毒性探讨，结果如下：阿德福韦酯经口染毒大鼠LD_50=1296mg/kg(♀)，95%CI(760~2000mg/kg)；MC78新酯经口染毒大鼠LD_502000mg/kg(♀)；根据急性毒性分级标准，均属于低毒物质，且二者比较，MC78新酯的LD50大于阿德福韦酯，说明MC78新酯的急性毒性要低于阿德福韦酯。染毒后出现的毒性体现有：精神萎靡，竖毛；眼角分泌物，肛周污秽，腹泻，角弓反张。最后，选择大鼠灌胃MC78新酯14天重复染毒毒性试验来观察MC78新酯的重复给药毒性特点。动物随机分为溶剂对照组、MC78新酯低剂量35mg/kg组、中剂论文导读：较好的一致性。6.MC78新酯的毒性相当于或优于MC78，基本满足毒理学的成药条件。关键词：核苷酸类似物论文早期毒性筛选论文计算毒理学论文MC78新酯论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。缩略词对照表4-5摘要5-8ABS
量70mg/kg组、高剂量140mg/kg组和阳性对照阿德福韦100mg/kg组。结果发现：随着剂量升高，MC78新酯动物的体重呈现逐渐下降走势，但各剂量组与对照组相比没有显著性差别；以整个实验期间观察来看，低剂量组摄食量略高于对照组，中高剂量组摄食量与对照组相比则呈下降走势，但均无统计学差别，总体看来，MC78新酯对大鼠摄食量没有显著的影响。MC78新酯低、中、高三个剂量组随着剂量升高，肝脏系数呈下降走势，而阿德福韦酯阳性对照组的肝脏系数略高于溶剂对照组，但各给药组间与对照组均无显著性差别。MC78新酯高剂量组以及阳性对照组的肾脏系数高于对照组，差别具有统计学作用。病理组织学检查结果：MC78新酯低剂量35mg/kg组，中剂量70mg/kg组，高剂量140mg/kg组，均示肾脏结构正常；阿德福韦100mg/kg阳性对照组，示肾近曲小管上皮细胞有轻度损伤。低剂量组35mg/kg，中剂量组70mg/kg示肝细胞和肝组织结构正常；高剂量组140mg/kg示肝细胞肿胀等轻度损伤;阳性对照组阿德福韦100mg/kg示肝组织结构正常.低剂量组35mg/kg，中剂量组70mg/kg，高剂量组140mg/kg示小肠结构正常；阳性对照组阿德福韦100mg/kg示小肠粘膜层萎缩和小肠细胞损伤.淋巴组织在各剂量组结构均显示正常。综合以上探讨结果，得出以下结论：1.虽然MC78新酯急性毒性小，但高剂量组长期给药后显示一定的肝毒性；2.采取敏感特异的的生物标志物检测发现，MC78新酯可能有一定的肾毒性；3.对照药Adefovir具有肾毒性，与国外文献报道一致，说明此试验系统可信；4.MC78和MC78新酯在有无S9活化条件下均无致突变性；5.体内外实验结果与毒性预测软件的预测结果有较好的一致性。6.MC78新酯的毒性相当于或优于MC78，基本满足毒理学的成药条件。关键词：核苷酸类似物论文早期毒性筛选论文计算毒理学论文MC78新酯论文
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摘要5-8
ABSTRACT8-11
前言11-18
参考文献16-18
第一章 MC78新酯的计算毒理学预测18-22
材料与策略18-19
结果19-20
讨论20-21
参考文献21-22
第二章 MC78新酯的早期毒性筛选22-37
第一节 MC78新酯的基本细胞毒性23-26
材料与策略23-24
结果24-26
第二节 MC78新酯的致突变性探讨26-32
材料与策略26-31
结果31-32
第三节 MC78新酯的急性毒性上下法探讨32-35
材料与策略32-34
结果34-35
讨论35-37
第三章 MC78新酯的亚急性毒性探讨37-52
材料与策略38-41
结果41-50
讨论50-52
结论52-53
致谢53-54
综述54-67
参考文献64-67
发表及撰写文章67-73