谈谈拮抗剂融合人血清白蛋白白介素1受体拮抗剂药效学和药代动力学

论文导读：.1长效重组蛋白类药物15-162.2蛋白类药物的药代动力学探讨16-182.3蛋白类药物靶向技术18-203类风湿性关节炎动物模型20-233.1胶原诱导的类风湿性关节炎模型(CIA,Collagen-InducedArthritis)203.2蛋白聚糖诱导关节炎(PGIA,proteoglycan-inducedarthritis)20-213.3链球菌细胞壁关节炎(SCW)213.4佐剂型关节炎(AIA,Adj
摘要：背景：白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)是天然的IL-1拈抗剂,被用来治疗类风湿关节炎及其它炎症性疾病。但其缺点是半衰期较短,并且缺乏特异的靶向性,导致其必须频繁给药,以而带来一些副作用。人血清白蛋白被广泛的采取作为药物载体,以延长药物的半衰期。此外,人血清白蛋白已被证明可以选择性的在炎症部位聚集,这使得白蛋白成为治疗类风湿性关节炎的理想药物载体。结果：(1)成功表达出了融合蛋白,通过Western Blot进行了鉴定,并利用镍离子亲和层析技术得到了纯度较高的融合蛋白；(2)融合蛋白与IL-Ira抑制IL-1β对A375-S2细胞的杀伤呈现剂量依赖性,利用MTT法计算两者的IC50,融合蛋白IC50为0.74nmol/ml,IL-1ra IC50为0.73nmol/ml,两者生物活性相似；(3)通过建立胶原诱导的类风湿性关节炎模型,进行融合蛋白的药代动力学探讨,显示IL-1ra约0.34小时的半衰期,融合蛋白的半衰期延长到10小时左右,是非原蛋白的30倍。融合蛋白在类风湿性关节炎模型小鼠的炎症关节中体现出特异性的聚集,注射48小时后,其在炎症关节中的分布是健康关节的15倍,而IL-1ra则分布在其它的器官(如：肝,肾,脾,肺)中；(4)在CIA小鼠二次免疫后,利用融合蛋白及IL-1ra治疗CIA小鼠,以延迟发病的时间,炎症评分,病理切片,荧光定量PCR检测关节炎性因子的表达量等观测水平,融合蛋白都显示出了更好的对RA的抑制功能。讨论：本实验探讨显示,该融合蛋白可能具有更大的临床运用价值,如治疗类风湿关节炎等领域。并且白蛋白融合技术所具有的,介导小分子蛋白药物靶向炎症部位的特性,使其可能成为一个有前景的治疗工具。关键词：人血清白蛋白论文白细胞介素受体1拮抗剂论文融合蛋白论文药效学论文药代动力学论文类风湿性关节炎论文
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Abstract6-8
目录8-10
缩略语10-11
第一章 绪论11-25
1 细胞白介素-111-14

1.1 IL-1与类风湿性关节炎12-13

1.2 IL-1ra13-14

1.3 Anakinra14

2 蛋白类药物14-20

2.1 长效重组蛋白类药物15-16

2.2 蛋白类药物的药代动力学探讨16-18

2.3 蛋白类药物靶向技术18-20

3 类风湿性关节炎动物模型20-23
3.1 胶原诱导的类风湿性关节炎模型(CIA,Collagen-Induced Arthritis)20
3.2 蛋白聚糖诱导关节炎(PGIA,proteoglycan-induced arthritis)20-21

3.3 链球菌细胞壁关节炎(SCW)21

3.4 佐剂型关节炎(AIA,Adjuvant-Induced Arthritis)21
3.5 油诱导的关节炎(OIA,oil-induced arthritis)21-22
3.6 朴日斯烷诱导的关节炎(Pristane-induced arthritis)22

3.7 转基因自发性模型22-23

4 立题背景23-24
5 实验案例设计24-25
第二章 IL-1RA和HSA-IL-1RA的表达、纯化及体外活性浅析25-38
1 实验材料与仪器25-27

1.1 主要仪器25

1.2 主要试剂25-26

1.3 表达菌株26

1.4 细胞株26

1.5 溶液配制26-27

2 实验策略27-30

2.1 融合蛋白的表达27

2.2 融合蛋白的分离纯化27-28

2.3 Western Blot鉴定28-29

2.4 融合蛋白体外活性浅析29-30

3 结果30-37

3.1 融合蛋白的表达及Western Blot鉴定30-31

3.2 分步梯度洗脱31-32

3.3 HSA-IL-1ra的纯化32-33

3.4 MTT法测HSA-IL1Ra融合蛋白的活性33-35

3.5 HSA-IL-1Ra结合A375-S2细胞表面受体功能35-37

4、讨论37-38

第三章 IL-1RA和HSA-IL-1RA在CIA小鼠中的药代动力学及药效学探讨38-56
1 实验材料38

1.1 实验动物38

1.2 实验试剂38

2 试验策略论文导读：46-473.5~(125)I-HSA-IL-1ra和~(125)1-IL-1ra的血药浓度-时间曲线47-483.6~(125)I-HSA-IL-1ra和~(125)I-IL-1ra在小鼠体内组织器官的分布情况48-513.7HSA-IL-1ra和IL-1ra对小鼠炎症评分的影响513.8病理学检测结果51-533.9荧光定量PCR检测各治疗组组炎症因子表达水平53-544讨论54-56第四章结论56-57参考文献57-62致谢
38-43

2.1 胶原诱导的类风湿性关节炎模型的建立38-39

2.2 初步药代动力学探讨39-40

2.3 融合蛋白对CIA小鼠的影响40-43

3 结果43-54

3.1 CIA模型的建立43-44

3.2 小鼠体重的变化44-45

3.3 小鼠炎症评分45-46

3.4 关节病理切片结果46-47

3.5 ~(125)I-HSA-IL-1ra和~(125)1-IL-1ra的血药浓度-时间曲线47-48
3.6 ~(125)I- HSA-IL-1ra和~(125)I-IL-1ra在小鼠体内组织器官的分布情况48-51

3.7 HSA-IL-1ra和IL-1ra对小鼠炎症评分的影响51

3.8 病理学检测结果51-53

3.9 荧光定量PCR检测各治疗组组炎症因子表达水平53-54

4 讨论54-56
第四章 结论56-57
参考文献57-62
致谢62