谈纯化苍蝇抗菌肽SK84表纯化及其结构和功能初步科技

论文导读：略，并对获得的蛋白进行了功能和结构的初步探讨，主要结果如下：1)构建了重组质粒pET-32a(+)-SK84-His6，并在大肠杆菌中获得成功表达。2)优化了诱导表达条件，最佳条件为：初始菌液OD值，1.0；IPTG浓度，1.0mM；温度，30℃；诱导时间，4h。3)活性探讨发现，表达的SK84对枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌有一定的抑制作用，并推动HepG2细胞的凋
摘要：抗菌肽是生物体自身产生的具有抑杀微生物效果的活性肽，两亲性的α螺旋结构为其发挥抗菌作用提供了重要基础。与抗生素相比，抗菌肽抗菌谱广、不易引发耐药性，因而有望被开发为抗微生物感染的新型药物。SK84是陆婕博士于2006年以蝇蛆中鉴定的一种新型抗菌肽，探讨发现，SK84能裂解细胞膜，对部分革兰氏阳性菌如枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、金葡萄球菌等有杀伤作用，并且能够抑制肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231等的增殖。SK84在天然产物中含量很少，分离纯化困难，而化学合成成本较高，因而限制了对其功能与作用机制的探讨。本课题建立了一种新的SK84生产策略，并对获得的蛋白进行了功能和结构的初步探讨，主要结果如下：1)构建了重组质粒pET-32a(+)-SK84-His6，并在大肠杆菌中获得成功表达。2)优化了诱导表达条件，最佳条件为：初始菌液OD值，1.0；IPTG浓度，1.0mM；温度，30℃；诱导时间，4h。3)活性探讨发现，表达的SK84对枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌有一定的抑制作用，并推动HepG2细胞的凋亡。4)检测了重组表达蛋白SK84-His6的二级结构，发现SK84-His6可以形成两亲性的α螺旋结构。综上所述，通过原核表达可以获得具有一定活性的高纯度的SK84蛋白，此策略提供了一种新的SK84获取途径，为今后的进一步探讨奠定了良好基础。此外，结构浅析的结果提示，SK84可能通过两亲性的α螺旋结构发挥抗菌作用。关键词：SK84论文抗菌肽论文原核表达论文纯化论文
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Abstract5-9
1 概论9-16

1.1 抗菌肽的介绍9-11

1.2 抗菌肽的功能与作用机理11-14

1.3 苍蝇抗菌肽 SK8414-15

1.4 本探讨的目的和作用15-16

2 材料与策略16-27

2.1 实验材料与仪器16-17

2.2 常用溶液的配制17-19

2.3 实验策略19-27

3 结果与浅析27-43

3.1 重组质粒 pET-32a+-SK84-His6 的构建27-30

3.2 融合蛋白 SK84-His6 的表达与纯化30-35

3.3 融合蛋白 SK84-His6 诱导表达条件的优化35-38

3.4 融合蛋白 SK84-His6 的抗菌活性38-39

3.5 融合蛋白 SK84-His6 对 HepG2 细胞凋亡的影响39-40

3.6 融合蛋白 SK84-His6 的二级结构浅析40-43

4 讨论43-46

4.1 SK84-His 蛋白的结构与功能43-45

4.2 选择大肠杆菌原核表达系统的可行性45-46

5 总结46-47

5.1 本探讨获得的结果46

5.2 值得进一步开展的工作46-47

致谢47-48
参考文献48-53
附录 1 在攻读硕士学位期间发表的学术论文53-54
附录 2 文中所用缩写54-55
附录 3 蛋白质 SK84-His6 的二级结构预测结果55-57