研讨马勃脱皮马勃液体发酵及总生物碱提取优化结论

论文导读：
摘要：近年的探讨显示，脱皮马勃中生物碱成分具有广阔的开发前景。本论文在脱皮马勃液体发酵的基础上，对脱皮马勃的总生物碱提取和纯化策略进行优化，以期对脱皮马勃的药用价值进一步开发和利用。主要探讨内容如下：1、对脱皮马勃液体发酵培养基进行优化，获得最优摇瓶配方为蔗糖3%、黄豆粉1%、蛋白胨0.2%、0.15%磷酸二氢钾、0.05%硫酸镁。按优化后培养基2%接种量培养5d后干燥菌丝体重量可达0.72g/100mL。2、利用7L发酵罐装液量5L对液体发酵条件进行反应器放大，最终菌丝体获得量为6.15g/L，与摇瓶接近。3、对酸性染料比色法测定马勃总生物碱含量的策略进行选择，最终确定最适酸性染料为溴百里酚蓝，测定波长为410nm。此测定策略相对标准偏差为0.9%，平均加样回收率为100.32%，结果稳定可靠。4、结合利用单因素试验、正交设计和响应面法，探讨醇回流法提取脱皮马勃总生物碱时提取pH、乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数的影响，建立了一个总生物碱得率与影响因子的多元二次回归方程，并依此确定总生物碱的最佳提取条件。结果表明最佳提取条件为pH2的78%乙醇，料液比1:18，提取时间188min×3。5、选用常用的5种大孔吸附树脂进行静态吸附和静态解吸试验，HPD-100大孔吸附树脂较适合马勃总生物碱的分离纯化。纯化后生物碱纯度以28.36%提升到60.58%，纯化倍数为

2.14。关键词：脱皮马勃论文液体发酵论文总生物碱论文响应面论文大孔吸附树脂论文

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Abstract4-8

1. 文献综述8-15

1.1 马勃介绍8

1.1 马勃概述8

1.2 三种正品马勃的品种性状8

1.2 马勃的主要成分8-9

1.3 马勃的药理作用9-11

1.3.1 抗肿瘤作用9

1.3.2 生长调节作用9-10

1.3.3 抗氧化作用10

1.3.4 抑菌作用10

1.3.5 止血作用10

1.3.6 抗炎止咳作用10

1.3.7 杀虫作用10-11

1.3.8 其他临床运用11

1.4 生物碱探讨概述11

1.5 生物碱的提取策略11-13

1.5.1 传统提取策略12

1.5.2 超声辅助提取论文导读：.4摇瓶工艺验证29-304.2脱皮马勃发酵罐反应器放大304.3酸性染料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量30-344.3.1测定波长和染色剂的选择30-314.3.2染色稳定性和染色剂的选择314.3.3染色剂用量的选择31-324.3.4重复性实验324.3.5乌头碱标准曲线的绘制32-334.3.6加样回收率实验33-344.3.7总生物碱浓度与吸光度线性联系验证
12

1.5.3 微波辅助提取12

1.5.4 双水向萃取技术12

1.5.5 超临界流体萃取技术12-13

1.6 生物碱的分离纯化策略13-15

1.6.1 柱色谱法13

1.6.2 大孔吸附树脂分离13

1.6.3 离子交换树脂分离13-14

1.6.4 分子排阻层析14

1.6.5 其他新策略14-15

2. 引言15-16

3. 材料与策略16-25

3.1 试验材料16-18

3.

1.1 材料与菌种16

3.

1.2 实验仪器16-17

3.

1.3 试剂17-18

3.

1.4 培养基18

3.

1.5 软件18

3.2 实验策略18-25
3.

2.1 脱皮马勃液体发酵条件优化18-19

3.

2.2 脱皮马勃发酵罐反应器放大19

3.

2.3 酸性染料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量19-21

3.

2.4 脱皮马勃总生物碱提取优化21-22

3.

2.5 脱皮马勃总生物碱纯化22-25

4. 结果与浅析25-48

4.1 脱皮马勃液体发酵条件优化25-30

4.

1.1 最佳碳源的选择25-26

4.

1.2 最佳氮源的选择26-27

4.

1.3 无机盐添加量的影响27-29

4.

1.4 摇瓶工艺验证29-30

4.2 脱皮马勃发酵罐反应器放大30

4.3 酸性染料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量30-34

4.

3.1 测定波长和染色剂的选择30-31

4.

3.2 染色稳定性和染色剂的选择31

4.

3.3 染色剂用量的选择31-32

4.

3.4 重复性实验32

4.

3.5 乌头碱标准曲线的绘制32-33

4.

3.6 加样回收率实验33-34

4.

3.7 总生物碱浓度与吸光度线性联系验证34

4.4 脱皮马勃总生物碱提取优化34-41

4.1 有机溶剂的选择34-35

4.2 醇回流 pH 的选择35

4.3 乙醇浓度范围的确定35-36

4.4 提取时间范围的确定36

4.5 正交优化组合设计36-37

4.6 Box-Behnken 响应面优化37-41

4.5 脱皮马勃总生物碱纯化41-48

4.5.1 粗提液的制备41

4.5.2 纯化树脂的选择41-42

4.5.3 吸附 pH 的选择42-43

4.5.4 样品生物碱浓度的选择及吸附等温线绘制43-44

4.5.5 静态吸附曲线的绘制44-45

4.5.6 洗脱液乙醇浓度的选择45

4.5.7 洗脱液 pH 的选择45

4.5.8 纯化工艺的验证和参数计算45-48

5. 讨论48-50
5.1 脱论文导读：料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量485.4脱皮马勃总生物碱提取优化48-495.5脱皮马勃总生物碱纯化49-506.结论50-516.1脱皮马勃液体发酵优化506.2脱皮马勃发酵罐反应器放大506.3酸性染料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量506.4脱皮马勃总生物碱提取优化506.5脱皮马勃总生物碱纯化50-51参考文献51-56致谢56-57作者介绍57
皮马勃液体发酵优化48

5.2 脱皮马勃发酵罐反应器放大48

5.3 酸性染料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量48

5.4 脱皮马勃总生物碱提取优化48-49

5.5 脱皮马勃总生物碱纯化49-50

6. 结论50-51

6.1 脱皮马勃液体发酵优化50

6.2 脱皮马勃发酵罐反应器放大50

6.3 酸性染料比色法测定脱皮马勃总生物碱含量50

6.4 脱皮马勃总生物碱提取优化50

6.5 脱皮马勃总生物碱纯化50-51

参考文献51-56
致谢56-57
作者介绍57