研究克隆禽呼肠孤病毒L2基因克隆与序列

论文导读：服人员哦。摘要3-4Abstract.4-71引言7-221.1禽呼肠孤病毒概述71.2病原学7-91.2.1形态与特点7-81.2.2生物学特性8-91.3流行病学9-101.3.1易感动物91.3.2传染源9-101.3.3传播途径101.4临床症状101.5病理变化10-111.6诊断11-131.

6.1临床诊断111.2病理解剖111.3实

摘要：本试验提取禽呼肠孤病毒天津地区分离株(ARV T-98)和内蒙古地区分离株(ARV C-98)病毒的总RNA。参考GenBank中禽呼肠孤病毒176株(ARV176)的L2基因序列设计了5对特异性引物。运用一步法RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒的L2基因。将回收纯化得到的目的DNA与pEASY-T1载体链接,转化到感受态细胞,用蓝白斑法筛选阳性重组质粒,再用PCR法鉴定阳性重组质粒,然后将PCR鉴定为阳性的重组质粒送英潍捷基(上海)贸易有限公司(invitrogen)进行序列测定。运用DNAstar软件将测定序列进行拼接并与参考序列进行比较浅析。结果显示L2基因节段长3830bp,均含有完整的开放性阅读框(Open Reading Frame, ORF),编码区位于15～3794bp。、测定的禽呼肠孤病毒C-98、T-98株的L2基因序列已经登录GenBank,登录号分别是JN641888、JN641889。ARV C-98和ARV T-98的L2基因核苷酸及其推导的氨基酸的同源性均很高,分别为99.7%,99.4%；与ARV176、ARVS1133、ARV138、和ARV S-B的L2基因核苷酸同源性在83.9%～99.7%之间,推导的氨基酸同源性在96.4%～99.6%之间；与MRVBYD1、MRVSC-A、MRV T3D和MRV T4N的L1基因核苷酸同源性在53.4%～54.4%之间,推导的氨基酸同源性在53.9%～54.4%之间。系统发生树表明,ARV C-98、ARV T-98与ARV176、ARV S1133、ARV138、和ARV S-B处于同一进化分支,其中与ARV176和ARV S1133的遗传进化联系最近。与MRV BYD1、MRV SC-A、MRV T3D和MRV T4N处于不同的进化分支,遗传进化联系较远。关键词：禽呼肠孤病毒论文L2基因论文克隆论文序列浅析论文
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Abstract .4-7
1 引言7-22

1.1 禽呼肠孤病毒概述7

1.2 病原学7-9

1.2.1 形态与特点7-8

1.2.2 生物学特性8-9

1.3 流行病学9-10

1.3.1 易感动物9

1.3.2 传染源9-10

1.3.3 传播途径10

1.4 临床症状10

1.5 病理变化10-11

1.6 诊断11-13

1.6.1 临床诊断11

1.6.2 病理解剖11

1.6.3 实验室诊断11-12

1.6.4 分子生物学诊断12-13

1.7 防治13-14

1.8 疫苗14-15

1.8.1 弱毒疫苗14

1.8.2 灭活疫苗14-15

1.8.3 基因工程疫苗的探讨15

1.9 禽呼肠孤病毒分子生物学特性15-21

1.9.1 基因组15-16

1.9.2 病毒RNA的复制16-17

1.9.3 禽呼肠孤病毒基因编码的蛋白质及其功能17-21

1.10 探讨目的作用21-22

2 材料与策略22-27

2.1 材料22-23

2.

1.1 毒株22

2.

1.2 参考毒株L2基因序列及登录号22

2.

1.3 菌株及质粒22

2.

1.4 主要试剂及试剂盒22

2.

1.5 试验所用溶液及其配置22-23

2.

1.6 主要仪器设备23

2.2 策略23-27

2.1 引物的设计与合成23

2.2 病毒RNA的提取23-24

2.3 病毒目的基因一步法RT-PCR扩增24

2.4 病毒目的基因的克隆24-26

2.5 DNA 测序26

2.6 基因序列拼接26-27

2.7 序列比较浅析27

3 结果27-35

3.1 病毒目的基因L2一步法RT-PCR扩增结果27-28

3.2 重组质粒的PCR鉴定结果28

3.3 L2基因序列测定结果28-32

3.4 L2基因序列浅析结果32-35

3.4.1 L2基因核苷酸序列比较浅析结果32-33

3.4.2 L2基因推导氧基酸序列比较浅析结果33-34

3.4.3 L2基因核苷酸序列遗传进化浅析结果34-35

4 讨论35-37
5 结论37-38
致谢38-39
参考文献39-47
附录47-60
作者介绍60