试谈蛋白嗜水气单胞菌J-1株不同培养条件下胞外蛋白比较蛋白组学

论文导读：的信号肽结构,以生物信息学的角度说明鉴定蛋白均为胞外蛋白。已有探讨证明,本试验鉴定出的差别蛋白,如气溶素、溶血素、主要外膜蛋白、胞外蛋白酶,都是具有免疫原性的蛋白,可用于基因工程亚单位疫苗的生产制作。试验结果显示,培养温度的变化以及不同培养阶段生长环境的转变都对嗜水气单胞菌J-1株的胞外蛋白有很大影响。为今后
摘要：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)广泛有着于自然环境中是重要的水生动物病原菌,可引起鱼类的败血症,给水产养殖业造成极大的经济损失,同时还是重要的人畜共患病病原菌,严重危害了人类的身体健康。现有的灭活疫苗和减毒活疫苗的免疫效果不够理想,由此,研发新型的亚单位疫苗成为当务之急。对于致病菌而言,胞外蛋白起着重要的作用,可以分泌到胞外直接与宿主免疫系统发生作用,诱发机体产生良好的免疫保护力。本试验以嗜水气单胞菌J-1株为探讨对象,运用比较蛋白组学的技术和策略,浅析不同培养条件下其胞外蛋白的差别表达谱。通过二维凝胶电泳技术,获得嗜水气单胞菌J-1株在280C和370C两个培养温度下的胞外蛋白表达谱,通过比较浅析找出差别蛋白点,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索,成功鉴定出8个差别蛋白,包括：丝氨酸蛋白酶、溶血素、延伸因子Tu、半乳糖ABC转运子、主要外膜蛋白、假定蛋白AHA0616和气溶素前体。其中,2个温度上调蛋白,6个温度下调蛋白。通过比较浅析嗜水气单胞菌J-1株在280C培养时,8h和14h的二维电泳图谱,以及37。C培养时,8h和14h的二维电泳图谱,间接浅析细菌在这两个温度条件下,对数期和稳定期胞外蛋白的差别。分别鉴定出28。C培养条件下的7个差别蛋白和37。C培养条件下的5个差别蛋白,包括：丝氨酸蛋白酶、胞外蛋白酶、核酸酶、D-核糖转运子亚基RbsB、精氨酸ABC转运子、腐胺ABC转运子、精氨酸-鸟氨酸绑定蛋白、溶血素和假定蛋白AHA0616。利用在线信号肽预测软件SignalP3.0进行浅析,结果显示所有差别蛋白均含有典型的信号肽结构,以生物信息学的角度说明鉴定蛋白均为胞外蛋白。已有探讨证明,本试验鉴定出的差别蛋白,如气溶素、溶血素、主要外膜蛋白、胞外蛋白酶,都是具有免疫原性的蛋白,可用于基因工程亚单位疫苗的生产制作。试验结果显示,培养温度的变化以及不同培养阶段生长环境的转变都对嗜水气单胞菌J-1株的胞外蛋白有很大影响。为今后疫苗生产历程中,通过调整培养温度和制约培养时间优化疫苗生产条件提供了论述基础。关键词：培养温度论文培养时间论文胞外蛋白论文比较蛋白组学论文疫苗论文
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ABSTRACT7-9
第一篇 文献综述9-29
第一章 嗜水气单胞菌毒力因子的探讨进展9-21
1 生物学特性9
2 鉴定策略9-10
3 毒力因子10-14
4 展望14-15
参考文献15-21
第二章 蛋白质组学的探讨进展21-29
1 探讨策略与技术21-24
2 比较蛋白组学24-25
3 展望25-26
参考文献26-29
第二篇 试验探讨29-63
第一章 嗜水气单胞菌J-1株不同培养温度下胞外蛋白的比较蛋白组学探讨29-45
摘要29-30
1 材料与策略30-35
2 结果35-38
3 讨论38-41
参考文献41-43
Abstract43-45
第二章 嗜水气单胞菌J-1株不同培养时间胞外蛋白的比较蛋白组学探讨45-57
摘要45
1 材料与策略45-47
2 结果47-52
3 讨论52-54
参考文献54-55
Abstract55-57
第三章 培养温度对嗜水气单胞菌J-1株毒力的影响57-63
摘要57
1 材料与策略57-58
2 结果58
3 讨论58-60
参考文献60-61
Abstract61-63
全文总结63-65
附录165-67
附录267-71
致谢71