副鸡禽杆菌免疫优势模拟表位鉴定及免疫原性浅析

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摘要：鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌(Avibacterium paragalpnarum, Apg)所致鸡的一种的细菌性疾病医药论文。副鸡禽杆菌有A、B、C三种血清型,其保护性抗原成分尚不明了论文大全。利用原核表达系统成功表达了副鸡禽杆菌三个血清型菌株的血凝素蛋白,并分析了重组血凝素蛋白的免疫原性;应用噬菌体肽库技术筛选和鉴定出副鸡禽杆菌的2个免疫优势模拟抗原表位,分析了模拟抗原表位的免疫原性,研究结果为研制与开发鸡传染性鼻炎新型疫苗奠定了基础。副鸡禽杆菌A、B、C三种血清型代表性菌株Hp8、Dapan和Modesto的血凝素基因序列,分别设计特异性引物,PCR技术扩增出副鸡禽杆菌三种血清型菌株的血凝素基因,序列测定结果,三种血清型的血凝素基因全长分别为1 035bp、1 038bp和1 026bp。分别将PCR扩增产物克隆到pET-32a (+)载体,构建出原核表达重组质粒pET- A、pET- B和pET- C。表达产物经Western-blotting及血凝和血凝抑制试验鉴定,结果,重组血凝素可以与相应的副鸡禽杆菌阳性血清特异性,并且都具有凝集鸡红细胞的活性。用纯化的重组血凝素作为免疫原分别免疫鸡,其血凝抑制抗体滴度均达到1:10以上;用相应菌株攻毒后,免疫鸡了保护,大试验鸡出现鼻炎症状,三种重组血凝素的保护率分别为3/10,2/10和2/10。,重组血凝素蛋白具有良好的免疫原性,但不能诱导的免疫保护。结果提示,血凝素可能不是副鸡禽杆菌的惟一保护性抗原。利用Biosun和Hopp-wood分子生物学软件分析了副鸡禽杆菌Hp8株血凝素蛋白的B细胞表位,结果发现在血凝素蛋白的第86位氨基酸和第186位氨基酸的附近区域可能是2个表位区,以其前后15个氨基酸作为线性表位序列( A1-YDDFGRLRQDGET ,A2-NKVGRWEKDGSRVDY)大学毕业论文。基因工程技术将其分别展示到大肠杆菌GI826的鞭毛上,经抗原抗体试验,构建的重组菌不具有与副鸡禽杆菌抗体活性,提示选定的2个血凝素蛋白的线性抗原肽缺乏免疫活性论文标准格式。利用噬菌体随机12肽库,以A型副鸡禽杆菌多克隆抗体和C型副鸡禽杆菌单克隆抗体纯化IgG筛选。结果,用多抗筛选的噬菌体克隆中,50%具有核心氨基酸序列A-DP(M)L,单抗筛选的噬菌体克隆中,80%以上带有共有氨基酸序列Y-P-Q(A)WW硕士论文。含有上述共有序列的噬菌体克隆不仅可以与抗体特异,并与副鸡禽杆菌抗原竞争抗体。将编码YGLLDPLFKP和YSPHQWWLSG的DN段分别插入质粒pFpTrx,转化大肠杆菌GI826并在鞭毛上成功展示,构建的重组菌能与相应抗体特异毕业小结。用2个重组菌免疫鸡产生的相应抗体分别能与A型副鸡禽杆菌0083株和C型副鸡禽杆菌Modesto株,攻毒试验结果,免疫鸡分别了4/8和3/8的免疫保护。结果提示,鉴定出的副鸡禽杆菌的2个免疫优势模拟表位可作为候选表位,具有研制与开发鸡传染性鼻炎新型疫苗的潜力毕业论文范例。关键词：副鸡禽杆菌论文血凝素论文原核表达论文模拟表位论文免疫原性论文
摘要5-6
Abstract6-10
插图与附表清单10-12
缩略词表12-14
章 引言14-17

1.1 国内外研究现状14-15

1.2 研究的目的与15-16

1.3 研究内容与技术路线16

1.4 研究16-17

章 副鸡禽杆菌血凝素基因的克隆表达及免疫原性分析17-34

2.1 前言17

2.2 和方法17-27

2.3 结果与分析27-30

2.4 讨论30-33

2.5 小结33-34

章 副鸡禽杆菌血凝素蛋白抗原表位的预测34-40

3.1 前言34

3.2 与方法34-35

3.3 结果与分析35-39

3.4 讨论39

3.5 小结39-40

章 副鸡禽杆菌免疫优势模拟抗原表位的筛选与鉴定40-51

4.1 前言40

4.2 与方法40-43

4.3 结果与分析43-49

4.4 讨论49-50

4.5 小结50-51

第五章 副鸡禽杆菌免疫优势模拟抗原表位在大肠杆菌鞭毛上的展示及其免疫原性分析51-63

5.1 前言51

5.2 与方法51-55

5.3 结果与分析55-61

5.4 讨论61-62

5.5 小结62-63

第六章 63-64
第七章 创新点64-65
第八章 文献综述65-82
8.1 副鸡禽杆菌研究进展65-73
8.2 表面展示技术及其在抗原表位研究中的应用73-82
参考文献82-93
致谢93-94
作者简介94