试述细胞蟾毒灵抗肿瘤作用机制蛋白组学

论文导读：
摘要：近来年，尽管宫颈癌的治疗案例不断改善，但它仍然是威胁女性生命的恶性肿瘤之一。蟾毒灵(bufapn)是中药蟾酥中提取的一种活性最强的毒性配基。探讨发现，蟾毒灵具有广泛的抗肿瘤作用，可以诱导多种肿瘤细胞分化和凋亡。但是，蟾毒灵抗肿瘤作用的分子机制还不完全清楚，其作用靶点的蛋白质组学探讨尚未见报道。本课题选用人宫颈癌HeLa细胞株作为受试对象，在确定蟾毒灵对HeLa细胞的细胞毒性的基础上，运用蛋白质组学技术，考察蟾毒灵作用后24h的细胞总蛋白质表达谱，找出蟾毒灵诱导的差别表达蛋白，进一步对这些蟾毒灵的可能蛋白靶点进行验证并浅析蟾毒灵可能作用机制。MTT试验结果表明蟾毒灵对HeLa细胞具有较强的细胞毒作用，其IC50值为154±21.5nmol·L-1（24h）；流式细胞浅析结果和细胞核形态观察表明蟾毒灵可以诱导细胞凋亡；运用蛋白质双向凝胶电泳对蟾毒灵作用于HeLa细胞24h后的蛋白质表达谱进行浅析，找出差别蛋白点；利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定差别蛋白点。共鉴定出11个差别表达蛋白点，包括2个上调的蛋白点RibosomaL protein、S-Adenosylmethionine Synthetase2和9个下调的蛋白点nudix-type motif5、 vimentin、 hnRNP C1/hnRNP C2variant、 hnrpK、 hnrpKisoform a variant（两个点均为此蛋白）、HSP27、macrophage-capping protein、SELENBP1protein。这些蛋白可能是蟾毒灵在HeLa细胞中的作用靶点。Westernblotting浅析heat shock protein27、vimentin、HNRPK在蟾毒灵处理后的表达调节结果与双向电泳的结果吻合。最后我们运用生物信息学预测了蟾毒灵的作用网络，并推测其凋亡诱导作用可能是多个靶点蛋白共同参与的结果。关键词：蟾毒灵论文HeLa细胞论文细胞毒性论文双向电泳论文蛋白质组学论文
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ABSTRACT3-7
第1章 前言7-19
1.1 蟾毒灵的探讨概况7论文导读：4试验策略21-252.4.1试验分组212.4.2HeLa细胞培养21-222.4.3MTT检测试验22-232.4.4细胞凋亡检测试验232.4.5细胞核形态观察23-242.4.6细胞周期检测试验24-252.4.7统计学浅析252.5结果与浅析25-282.5.1MTT法检测蟾毒灵抑制HeLa细胞增殖的效应25-262.5.2蟾毒灵对HeLa细胞凋亡的影响26-272.5.3凋亡细胞形态观
-9

1.1 蟾毒灵的抗肿瘤活性探讨8-9

1.2 双向电泳在蛋白质组学中的进展及运用9-16

1.2.1 双向电泳在蛋白质组学中的进展9-10

1.2.2 双向电泳的基本历程及探讨近况10-13

1.2.3 双向电泳在蛋白质组学中的运用13-16

1.3 质谱技术16-17

1.4 探讨内容及作用17-19

第2章 蟾毒灵抗肿瘤作用的体外药效学探讨19-29

2.1 试剂19-20

2.2 主要溶液配制20-21

2.3 主要仪器与设备21

2.4 试验策略21-25

2.4.1 试验分组21

2.4.2 HeLa 细胞培养21-22

2.4.3 MTT 检测试验22-23

2.4.4 细胞凋亡检测试验23

2.4.5 细胞核形态观察23-24

2.4.6 细胞周期检测试验24-25

2.4.7 统计学浅析25

2.5 结果与浅析25-28

2.5.1 MTT 法检测蟾毒灵抑制 HeLa 细胞增殖的效应25-26

2.5.2 蟾毒灵对 HeLa 细胞凋亡的影响26-27

2.5.3 凋亡细胞形态观察27

2.5.4 蟾毒灵对细胞周期阻滞的诱导作用27-28

2.6 本章小结28-29

第3章 蟾毒灵作用于 HeLa 细胞靶标蛋白质的寻找29-47

3.1 试剂29-30

3.2 主要溶液配制30-31

3.3 蛋白电泳胶的配方31-33

3.1 双向电泳垂直胶配制31-32

3.2 SDS-PAGE 浓缩胶和分离胶配方32

3.3 主要仪器与设备32-33

3.4 试验策略33-40

3.4.1 蛋白质样品的提取和保存33

3.4.2 蛋白质样品的含量测定33-34

3.4.3 蛋白质双向凝胶电泳34-37

3.4.4 蛋白质质谱鉴定37-38

3.4.5 Western Blotting38-40

3.4.6 生物信息学构建蛋白质相互作用网络40

3.5 结果与浅析40-45

3.5.1 双向电泳图谱浅析40-43

3.5.2 MALDI-TOF-MS 图谱浅析鉴定43-44

3.5.3 Western Blotting 验证44

3.5.4 生物信息学构建蛋白质相互作用网络44-45

3.6 本章小结45-47

3.6.1 蟾毒灵作用于 HeLa 细胞蛋白质组学试验45-46

3.6.2 与蟾毒灵作用相关的靶标蛋白质46

3.6.3 Western Blotting 验证46

3.6.4 与蟾毒灵作用相关的蛋白生物信息学网络46-47

第4章论文导读：结论47-504.1蟾毒灵抗肿瘤作用的体外药效学探讨474.2蟾毒灵作用于HeLa靶标蛋白质的寻找47-50参考文献50-60缩略语词汇表60-61致谢61-62攻读硕士学位期间的探讨成果62上一页123
结论47-50

4.1 蟾毒灵抗肿瘤作用的体外药效学探讨47

4.2 蟾毒灵作用于 HeLa 靶标蛋白质的寻找47-50

参考文献50-60
缩略语词汇表60-61
致谢61-62
攻读硕士学位期间的探讨成果62