浅谈萃取二氧化硅纳米粒子固相萃取全血中DNA

论文导读：0-412.3.5DNA纯化样品的PCR实验41-442.4小结44-46第3章顺序注射在线二氧化硅纳米粒子微柱固相萃取DNA的探讨46-603.1引言463.2实验部分46-513.2.1实验试剂和溶液配制46-473.2.2仪器装置47-483.2.3实验流程48-513.3结果与讨论51-583.3.1PP微孔滤膜对DNA分离纯化的影响51-523.3.2在线DNA纯化系统的优化52-553.3.3在
摘要：全血样品基体复杂,对于其中的DNA进行浅析时,分离纯化操作常常是必要的。本论文以二氧化硅纳米粒子为DNA分离纯化的新型固相吸附剂,建立了一种快速、高效的DNA分离纯化策略,实现了全血中DNA的自动化在线萃取。第一章综述了DNA分离纯化的作用、进展历程和常用分离纯化策略,介绍了固相萃取法分离纯化DNA的原理、常用吸附材料,DNA在线固相萃取技术,以及纳米材料固相萃取策略探讨进展,最后提出本论文的工作目的及设计思想。第二章建立了以二氧化硅纳米粒子为固相吸附剂的DNA分离纯化策略。探讨了二氧化硅纳米粒子萃取DNA的机理,考察了胍盐浓度、样品溶液pH值、吸附时间、吸附温度、洗脱液pH值、洗脱时间、洗脱温度等实验条件对分离纯化效率的影响。在饱和胍盐条件下,二氧化硅纳米粒子对DNA的吸附效率在0.5min内即可达到98%,二氧化硅纳米粒子对DNA的平均吸附容量达124ng/mg。在55℃条件下,以1×TE(pH8.3)溶液洗脱15min,DNA回收率可达90%。整个固相萃取历程在25min内就能完成。第三章制作了二氧化硅纳米粒子萃取柱,以顺序注射技术为样品预处理手段,建立了全血DNA在线纯化策略。通过对萃取柱进行加热,提升了DNA的回收率,优化了上样流速、洗脱流速、萃取柱温度等实验条件。在最佳实验条件下,在线纯化系统对于DNA的回收率达69%,整个萃取历程所需时间仅为4min。利用该纯化历程处理的人全血样品的DNA产物,通过PCR扩增反应,验证了二氧化硅纳米粒子作为固相吸附剂对全血样品中DNA提取的纯化效果。第四章对本论文建立的快速、高效DNA分离纯化系统进行了总结和展望。关键词：二氧化硅纳米粒子论文固相萃取论文顺序注射系统论文DNA论文全血论文
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Abstract6-10
第1章 绪论10-26

1.1 引言10-11

1.2 DNA分离纯化的作用及进展历程11

1.3 DNA分离纯化技术介绍11-15

1.3.1 饱和酚-氯仿法12

1.3.2 沉淀法12-13

1.3.3 离心分离法13

1.3.4 层析法13-14

1.3.5 萃取法14-15

1.3.6 其它纯化策略15

1.4 固相萃取法分离纯化DNA的探讨进展15-22

1.4.1 固相萃取法的原理和特点16-17

1.4.2 固相萃取法分离纯化DNA的常用吸附材料17-21

1.4.3 DNA在线固相萃取技术21-22

1.5 纳米材料固相萃取策略探讨进展22-23

1.6 本论文工作目的及设计思想23-26

第2章 二氧化硅纳米粒子离线固相萃取DNA的探讨26-46

2.1 引言26-27

2.2 实验部分27-29

2.1 实验试剂和溶液配制27-28

2.2 仪器装置28

2.3 实验历程28-29

2.3 结果与讨论29-44

2.3.1 二氧化硅纳米粒子萃取DNA的机理探讨29-32

2.3.2 二氧化硅纳米粒子对DNA的吸附32-37

2.3.3 洗脱条件的优化37-40

2.3.4 纯化系统的性能40-41

2.3.5 DNA纯化样品的PCR实验41-44

2.4 小结44-46

第3章 顺序注射在线二氧化硅纳米粒子微柱固相萃取DNA的探讨46-60

3.1 引言46

3.2 实验部分46-51

3.

2.1 实验试剂和溶液配制46-47

3.

2.2 仪器装置47-48

3.

2.3 实验流程48-51

3.3 结果与讨论51-58

3.1 PP微孔滤膜对DNA分离纯化的影响51-52

3.2 在线DNA纯化系统的优化52-55

3.3 在线纯化系统浅析性能55-56

3.4 DNA在线纯化样品的PCR实验56-58

3.4 小结58-60

第4章 结论60-62
参考文献62-70
致谢70-72
攻读硕士学位期间发表的论文72