简谈受体剑叶龙血素A和剑叶龙血素B对大鼠背根神经节细胞内游离钙离子浓度影响结论

论文导读：应；（2）在细胞外液无钙的情况下，施加上面陈述的两种药品，大鼠背根神经节细胞内钙离子浓度也有缓慢上升，但此时i上升幅度远远小于用标准细胞外液时的情况；（3）剑叶龙血素A对大鼠DRG细胞内钙离子浓度的影响强于剑叶龙血素B。另外，由于在加入剑叶龙血素A和剑叶龙血素B后，只有部分中小半径的DRG神经元（19-30μm）细胞内的游离钙离子
摘要：中药运用于临床已经有几千年的历史，但是用现代医药学策略探讨中药的作用机理开始于上世纪20年代。通过中药药理的探讨，不仅可以很好的验证传统中医药论述，还对深化和进展中药功效，使其更合理安全的运用于临床有很重要的作用。传统中药血竭因其具有祛瘀定痛，止血生肌等功效，已经在很多不同领域中得到了广泛的运用，但其部分作用原理尚未知晓。本实验采取染料Fluo-4以及钙荧光检测的策略，在培养的大鼠背根神经节(dorsal root gangpa, DRG)细胞上观察了传统中药血竭的两个类黄酮单体剑叶龙血素A（cochinchinenin A,CA）和剑叶龙血素B（cochinchinenin B,CB）对胞内游离钙离子浓度（[Ca~(2+)]i）的影响。经探讨发现：（1）标准外液情况下，在DRG细胞上施加剑叶龙血素A或剑叶龙血素B，均能够引起[Ca~(2+)]i的缓慢上升，且有着浓度依赖效应；（2）在细胞外液无钙的情况下，施加上面陈述的两种药品，大鼠背根神经节细胞内钙离子浓度也有缓慢上升，但此时[Ca~(2+)]i上升幅度远远小于用标准细胞外液时的情况；（3）剑叶龙血素A对大鼠DRG细胞内钙离子浓度的影响强于剑叶龙血素B。另外，由于在加入剑叶龙血素A和剑叶龙血素B后，只有部分中小半径的DRG神经元（19-30μm）细胞内的游离钙离子浓度产生变化，并且辣椒素受体通道也表达在中小神经元中。由此我们用辣椒平阻断辣椒素受体通道（TRPV1）后，施加剑叶龙血素A或剑叶龙血素B，结果发现二者还能够使大鼠背根神经节细胞内钙离子浓度缓慢升高。以上结果说明剑叶龙血素A或剑叶龙血素B能够诱导大鼠背根神经节细胞内游离钙离子浓度的缓慢升高主要是由于药物作用于细胞膜上受体通道，使得小部分细胞外钙离子内流，经过一系列的信号转导历程，触发内质网上的钙库释放钙离子而产生的。当胞外没有钙离子的时候，由于没有胞外钙离子流的触发，胞内钙库只能释放很少的钙离子，由此，钙离子浓度只有很少的升高。血竭的这两个单体在影响大鼠DRG胞内钙浓度上，剑叶龙血素A的做用更大；该反应机制可能与辣椒素受体通道无关。关键词：剑叶龙血素A论文剑叶龙血素B论文背根神经节论文胞内游离钙离子论文Fluo-4论文钙荧光检测论文辣椒素受体论文
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Abstract6-10
第1章 绪论10-22

1.1 近现代中药药理学以及血竭探讨近况10-11

1.1 近现代中药药理学的探讨10

1.2 血竭及其单体探讨近况10-11

1.2 辣椒素受体（TRPV1）通道药理学11-13

1.2.1 辣椒素受体11-12

1.2.2 辣椒素受体激动剂12-13

1.2.3 辣椒素受体经典阻断剂13

1.3 细胞内钙离子浓度的探讨作用及近况13-15

1.3.1 探讨背景及作用13-14

1.3.2 探讨进展14-15

1.4 钙荧光检测技术15-20

1.4.1 荧光染料的进展及原理15-16

1.4.2 激光共聚焦显微镜（LSCM）介绍16-17

1.4.3 LSCM 原理17-19

1.4.4 FLIPR Tetra 实时荧光成像浅析系统介绍19-20

1.5 本课题相关内容20-22

第2章 实验材料与策略22-28

2.1 材料和仪器22-23

2.2 实验记录液及实验药物的配制23-24

2.1 背根神经节细胞培养溶液配制23

2.2 实验记录液配制23

2.3 实验药物及染料溶液配制23-24

2.3 激光共聚焦（LSCM）钙荧光检测实验历程24-26

2.3.1 DRG 培养细胞的制备24

2.3.2 LSCM 实验历程24-25

2.3.3 LSCM 实验数据浅析25-26

2.4 FLIPR 钙荧光检测历程26-28

2.4.1 提取 hTRPV1 质粒26-27

2.4.2 hTRPV1 质粒瞬转至空 HEK293 细胞27

2.4.3 FLIPR 实验历程27-28

第3章 剑叶龙血素 A 和剑叶龙血素 B 对 DRG 细胞内钙离子浓度的影响机制浅析28-36
3.1 标准外液中剑叶龙血素 A 和剑叶龙血素 B 分别对 DRG 细胞内钙离子浓度的影响28-30

3.2 高渗透压细胞外液对 DRG 细胞内钙离子浓度的影响30-31

3.3 无钙外液中剑叶龙血素 A 和剑叶龙血素 B 分别对 DRG 细胞内钙离子浓度的影响31-33

3.4 辣椒素以及辣椒平对大鼠 DRG 细胞内游离钙离子浓度的作用33-34

3.5 阻断辣椒素受体通道后，剑叶龙血素 A 和剑叶龙血素 B 分别对 DRG 细胞内钙离子浓度的影响34-36
结论36-38
展望38-40
参考文献40-45
致谢45-46
附录A 攻读学位期间发表的学术论文46