谈述乙型肝炎肝内乙型肝炎病毒准种分布与核苷类似物停药复发联系

论文导读：
摘要：目的：探讨核苷类似物治疗后完全应答的慢性乙型肝炎患者在停药时肝内HBV准种分布情况，以准种角度探讨核苷类似物停药复发的分子病毒学机制。策略：选择经核苷类似物治疗后达到停药标准（实现HBeAg血清转换、HBVDNA持续阴转后继续用药48周）的慢性乙型肝炎患者10例，进行肝组织活检，抽提肝内HBVDNA，PCR扩增HBV RT区基因，克隆后测序。并对所有患者每4周随访1次，连续随访24周，观察停药后的病毒学应答情况，根据病毒学应答情况分为持续应答组和停药复发组。运用生物信息学技术浅析停药复发组和持续应答组之间肝内HBV准种的复杂度和多样性的差别，对病毒序列运用邻接法构建系统进化树。结果：停药复发组的血清HBsAg水平显著高于持久应答组，两组间差别有统计学差别(P=0.028)。两组间肝组织病理学结果无论是炎症水平还是纤维化分期以及肝组织内HBsAg的免疫组化差别均无统计学作用(P0.05)。停药复发组和持续应答组肝内HBV准种复杂度和准种多样性无统计学差别(P0.05)。进化树浅析结果显示停药复发组和持续应答组的序列分支枝长相似。结论：停药时的血清HBsAg水平越低越不易复发，可以作为核苷（酸）类似物停药复发的预测指标。肝组织病理学检测尚不能作为核苷（酸）类似物停药复发的预测指标。准种复杂度和多样性是否可以作为核苷（酸）类似物停药复发的预测指标有待进一步探讨。关键词：乙型肝炎病毒论文核苷类似物论文遗传异质性论文复发论文
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摘要5-6
Abstract6-8
引言8-12
探讨对象和策略12-19

1. 探讨对象12

2. 材料与策略12-19

2.1 实验主要仪器及器材12

2.2 实验主要试剂12-13

2.3 实验策略13-17

2.3.1 抽提肝组织内 HBV-DNA13-14

2.3.2 巢式 PCR 扩增 HBV RT 区基因14

2.3.3 PCR 产物纯化回收14-15

2.3.4 PCR 纯化产物加 A 与连接反应15-16

2.3.5 转化16

2.3.6 阳性重组克隆的鉴定16-17

2.3.7 阳性重组克隆的扩增17

2.3.8 阳性重组克隆的测序17

2.4 肝功能、乙肝两对半定量和血清及肝内 HBVDNA 载量检测17

2.5 生物信息学浅析17-19

2.5.1 序列的一般性处理17-18

2.5.

1.1 检测并去除混杂序列17-18

2.5.

1.2 序列比对18

2.5.

1.3 检测重组序列18

2.5.2 病毒基因型鉴定18

2.5.3 病毒准种浅析18-19

2.5.4 进化树浅析19

2.6 统计学处理19

结果19-25

3.1 一般情况19-20

3.2 停药时血清 HBsAg、HBcAb 及肝内 HBV DNA 与核苷（酸）类似物停药复发的联系20

3.3 病理学检测结果浅析20-21

3.4 HBV 基因组 RT 区准种的复杂度和多样性21-22

3.5 HBV S 区的终止子的突变情况22-23

3.6 进化树浅析23-25

讨论25-30
结论30-31
攻读学位期间发表的学术论文31-32
附录32-33
参考文献33-36
致谢36-37
综述37-43
参考文献41-43