研究阿尔DC疫苗治疗AD转基因鼠及新型MRI示踪剂检测Aβ一般
最后更新时间：2024-03-15
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论文导读：
摘要：目的：为了避开治疗阿尔茨海默病疫苗AN1792中的由佐剂所导致的脑膜脑炎等严重的副反应,我们用突变型的Aβ42刺激树突状细胞(树突状疫苗)制备阿尔茨海默病疫苗。在充分的评估其安全性和有效性的基础上,进一步了解树突状疫苗治疗阿尔茨海默病转基因鼠的作用机制。策略：PDAPPV7171转基因鼠48只,小鼠经耳朵打孔编号后采取随机数字表法分为PFDM组(接种经PFDMAβ1～42多肽致敏的树突状细胞疫苗,12只)、佐剂组(接种弗氏佐剂免疫的野生型Aβ1～42肽疫苗,为阳性对照组,12只)、DC组(接种未经多肽刺激的树突状细胞,为PFDM阴性对照组,12只)和PBS组(注射磷酸盐缓冲液,为佐剂组阴性对照组,12只)。另选择与PDAPPV7171且有相同遗传背景的健康8周龄C57/B6雌性小鼠50只(用于树突状细胞的培养)。腹腔注射,每组动物均间隔2周接种1次,共免疫3次。完成治疗后,处死动物,获取鼠脑,固定,石蜡包埋,然后以4um厚度连续切片；每隔六张脑切片,用免疫组化学染色的策略,观察小鼠脑组织中Ap蛋白,核激素肝X受体(LXR),三磷酸腺苷结合盒主动转运蛋白1(ABCA1),,膜结合蛋白酪氨酸磷酸酯酶(CD45),晚期糖基化终产物受体(RAGE),β位点APP内切酶(BACE)的表达水平。每张脑片在显微镜下选取5-10个区域,用体视学的策略选取海马区的CA1,CA2,CA3,DG,Rad和皮层区进行半定量统计浅析。灰度水平以0(染色强度最密集即黑色)到255(染色强度最轻即白色)不等。所有测量采取“双盲”的策略。结果：(1)Aβ蛋白表达：Aβ蛋白表达PFDM组(0.18±0.035)和阳性对照组(0.29±0.078)中显著减少,两种疫苗之间比较没有显著作用的。DC组和PBS组A β蛋白几乎没有转变。(2)LXR蛋白表达：LXR在PFDM组及DC组分别为0.046±0.0068,0.040±0.0083,显著高于佐剂组(0.010±0.0035)和PBS组(0.012±0.0032)。(3)ABCA1蛋白表达：ABCA1在PFDM组表达最高(9.28±1.04),DC组(4.39±0.60)显著高于佐剂组(1.52±0.56)和PBS组(1.42±0.54)。(4)CD45蛋白表达：在PFDM组表达为0.90±0.12,显著高于佐剂组(0.75±0.14),DC组(0.20±0.055),PBS组(0.20±0.043)。佐剂组与DC组及PBS组相比也是有显著差别,P值均小于0.001。(5)RAGE蛋白表达：佐剂组表达最低(0.59±0.22)与其他三组相比均有显著差别。PFDM组(1.75±0.39)也显著低于DC组(2.02±0.47)与PBS组(4.72±0.47)。(6)BACE蛋白表达PFDM组(1.09±0.32)高于DC组(0.88±0.11)和PBS组(0.89±0.084),而佐剂组(1.08±0.29)高于PBS组(P0.05)结论：1、该疫苗是通过多因素的作用达到一个新的免疫平衡的方式来减少Aβ的沉积。2、疫苗不发生类似AN1792实验副作用,可能取决于LXR/ABCA1通道。3、树突状细胞本身也在清除Aβ的历程中扮演着阻挡副反应发生的重要角色,且没有副作用。目的：制备一种无毒、特异性和敏感性良好的示踪剂,用以探测脑内沉积的Aβ,使其成为MR影像。策略：用超小型顺磁性氧化铁颗粒(ultraall superparamagnetic iron oxide, USPIO)共价聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)和Aβ1-42做成MRI照影剂。选取12-18个月大的AD转基因鼠30只及与其年龄对应的野生型的小鼠(C57B1/6J)12只,分为实验组(注射USPIO-PEG-Aβ1-42转基因鼠,12只),USPUO注射组(注射USPIO转基因鼠,9只),USPIO-Aβ1-42注射组(注射USPIO-Aβ1-42转基因鼠,9只)及与野生型小鼠组(注射USPIO-PEG-Aβ1-42,12只)。所有示踪剂注射剂量为0.2mMol Fe/Kg小鼠体重,通过左侧股静脉用PHD2000注射泵以60ul/min的速度注射小鼠体内,四小时后,在7-T的Micro-MRI下进行活体(in-vivo),持论文导读：
续2小时20min。完成活体扫描后,处死动物,获取鼠脑,PLP固定过夜,转移到DMSO中保存,直到离体(ex-vivo)大脑扫描；MRI每个层面距离是100umm,有利于接下来对MRI图像的处理。在MRI上探测到的Aβ在T2加权像上与病理切片进行比对。随后,用两种不同的策略对MRI图像进行浅析。对活体的MRI连续图像进行T2*的测量,对离体的MRI图像行两两比较的统计参数图(statistical parametric mapping, SPM)的体素浅析(voxel-based analysis, VBA).最后对脑组织行红颜色标记的Aβ染色和铁染色。另外选取两只转基因鼠通过颈内动脉注射相同剂量的USPIO-PEG-Aβ1-42用来评价注射方式的转变是否影响示踪剂在脑内的沉积。结果：注射了USPIO-PEG-Aβ1-42的转基因鼠与注射了USPIO, USPIO-Aβ1-42的转基因鼠行VBA浅析,结果显示在平层区和海马区有着显著差别；在注射了USPIO-PEG-Aβ1-42的转基因鼠与在注射了同样剂量的USPIO-PEG-Aβ1-42的野生型的小鼠相比,也得到了相类似的结果；通过T2*的浅析,结果显示出与VBA结果相一致；在双重染色的病理图片上我们能清楚地看到USPIO-PEG-Aβ1-42和脑内的Aβ很好的结合；经USPIO-PEG-Aβ1-42处理的试验组,无论是在活体的或离体鼠脑老年斑在MRI成像质量均很高。结论：示踪剂USPIO-PEG-Aβ1-42可以透过血脑屏障结合转基因鼠脑内Aβ,并能在MRI上清楚地成像。股静脉注射是一种微侵袭的注射策略,便于以后对AD脑内Aβ的探测以进行纵向比较。关键词：阿尔茨海默病论文树突状细胞论文Aβ肽论文疫苗论文淀粉样蛋白论文阿尔茨海默病论文微型磁共振论文超小型顺磁性氧化铁颗粒论文乙二醇论文体素形态计量法论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。第一部分中文摘要4-6
第一部分英文摘要6-8
第二部分中文摘要8-10
第二部分英文摘要10-14
中英文缩略词汇表14-16
第一部分：突变型Aβ42刺激树突状细胞治疗AD转基因鼠作用机制的探讨16-40
前言16-21
探讨近况、成果16-20
探讨目的、策略20-21
材料与策略21-28
结果28-37
讨论37-39
小结39-40
第二部分：利用MRI通过USPIO-PEG-Aβ42探测AD转基因鼠脑中Aβ40-77
前言40-45
探讨近况、成果40-44
探讨目的、策略44-45
材料和策略45-55
结果55-73
讨论73-76
小结76-77
结论77-78
参考文献78-91
发表论文和参加科研情况说明91-92
综述92-99
阿尔茨海默氏病免疫治疗的探讨进展92-99
综述参考文献96-99
致谢99-100
摘要：目的：为了避开治疗阿尔茨海默病疫苗AN1792中的由佐剂所导致的脑膜脑炎等严重的副反应,我们用突变型的Aβ42刺激树突状细胞(树突状疫苗)制备阿尔茨海默病疫苗。在充分的评估其安全性和有效性的基础上,进一步了解树突状疫苗治疗阿尔茨海默病转基因鼠的作用机制。策略：PDAPPV7171转基因鼠48只,小鼠经耳朵打孔编号后采取随机数字表法分为PFDM组(接种经PFDMAβ1～42多肽致敏的树突状细胞疫苗,12只)、佐剂组(接种弗氏佐剂免疫的野生型Aβ1～42肽疫苗,为阳性对照组,12只)、DC组(接种未经多肽刺激的树突状细胞,为PFDM阴性对照组,12只)和PBS组(注射磷酸盐缓冲液,为佐剂组阴性对照组,12只)。另选择与PDAPPV7171且有相同遗传背景的健康8周龄C57/B6雌性小鼠50只(用于树突状细胞的培养)。腹腔注射,每组动物均间隔2周接种1次,共免疫3次。完成治疗后,处死动物,获取鼠脑,固定,石蜡包埋,然后以4um厚度连续切片；每隔六张脑切片,用免疫组化学染色的策略,观察小鼠脑组织中Ap蛋白,核激素肝X受体(LXR),三磷酸腺苷结合盒主动转运蛋白1(ABCA1),,膜结合蛋白酪氨酸磷酸酯酶(CD45),晚期糖基化终产物受体(RAGE),β位点APP内切酶(BACE)的表达水平。每张脑片在显微镜下选取5-10个区域,用体视学的策略选取海马区的CA1,CA2,CA3,DG,Rad和皮层区进行半定量统计浅析。灰度水平以0(染色强度最密集即黑色)到255(染色强度最轻即白色)不等。所有测量采取“双盲”的策略。结果：(1)Aβ蛋白表达：Aβ蛋白表达PFDM组(0.18±0.035)和阳性对照组(0.29±0.078)中显著减少,两种疫苗之间比较没有显著作用的。DC组和PBS组A β蛋白几乎没有转变。(2)LXR蛋白表达：LXR在PFDM组及DC组分别为0.046±0.0068,0.040±0.0083,显著高于佐剂组(0.010±0.0035)和PBS组(0.012±0.0032)。(3)ABCA1蛋白表达：ABCA1在PFDM组表达最高(9.28±1.04),DC组(4.39±0.60)显著高于佐剂组(1.52±0.56)和PBS组(1.42±0.54)。(4)CD45蛋白表达：在PFDM组表达为0.90±0.12,显著高于佐剂组(0.75±0.14),DC组(0.20±0.055),PBS组(0.20±0.043)。佐剂组与DC组及PBS组相比也是有显著差别,P值均小于0.001。(5)RAGE蛋白表达：佐剂组表达最低(0.59±0.22)与其他三组相比均有显著差别。PFDM组(1.75±0.39)也显著低于DC组(2.02±0.47)与PBS组(4.72±0.47)。(6)BACE蛋白表达PFDM组(1.09±0.32)高于DC组(0.88±0.11)和PBS组(0.89±0.084),而佐剂组(1.08±0.29)高于PBS组(P0.05)结论：1、该疫苗是通过多因素的作用达到一个新的免疫平衡的方式来减少Aβ的沉积。2、疫苗不发生类似AN1792实验副作用,可能取决于LXR/ABCA1通道。3、树突状细胞本身也在清除Aβ的历程中扮演着阻挡副反应发生的重要角色,且没有副作用。目的：制备一种无毒、特异性和敏感性良好的示踪剂,用以探测脑内沉积的Aβ,使其成为MR影像。策略：用超小型顺磁性氧化铁颗粒(ultraall superparamagnetic iron oxide, USPIO)共价聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)和Aβ1-42做成MRI照影剂。选取12-18个月大的AD转基因鼠30只及与其年龄对应的野生型的小鼠(C57B1/6J)12只,分为实验组(注射USPIO-PEG-Aβ1-42转基因鼠,12只),USPUO注射组(注射USPIO转基因鼠,9只),USPIO-Aβ1-42注射组(注射USPIO-Aβ1-42转基因鼠,9只)及与野生型小鼠组(注射USPIO-PEG-Aβ1-42,12只)。所有示踪剂注射剂量为0.2mMol Fe/Kg小鼠体重,通过左侧股静脉用PHD2000注射泵以60ul/min的速度注射小鼠体内,四小时后,在7-T的Micro-MRI下进行活体(in-vivo),持论文导读：
续2小时20min。完成活体扫描后,处死动物,获取鼠脑,PLP固定过夜,转移到DMSO中保存,直到离体(ex-vivo)大脑扫描；MRI每个层面距离是100umm,有利于接下来对MRI图像的处理。在MRI上探测到的Aβ在T2加权像上与病理切片进行比对。随后,用两种不同的策略对MRI图像进行浅析。对活体的MRI连续图像进行T2*的测量,对离体的MRI图像行两两比较的统计参数图(statistical parametric mapping, SPM)的体素浅析(voxel-based analysis, VBA).最后对脑组织行红颜色标记的Aβ染色和铁染色。另外选取两只转基因鼠通过颈内动脉注射相同剂量的USPIO-PEG-Aβ1-42用来评价注射方式的转变是否影响示踪剂在脑内的沉积。结果：注射了USPIO-PEG-Aβ1-42的转基因鼠与注射了USPIO, USPIO-Aβ1-42的转基因鼠行VBA浅析,结果显示在平层区和海马区有着显著差别；在注射了USPIO-PEG-Aβ1-42的转基因鼠与在注射了同样剂量的USPIO-PEG-Aβ1-42的野生型的小鼠相比,也得到了相类似的结果；通过T2*的浅析,结果显示出与VBA结果相一致；在双重染色的病理图片上我们能清楚地看到USPIO-PEG-Aβ1-42和脑内的Aβ很好的结合；经USPIO-PEG-Aβ1-42处理的试验组,无论是在活体的或离体鼠脑老年斑在MRI成像质量均很高。结论：示踪剂USPIO-PEG-Aβ1-42可以透过血脑屏障结合转基因鼠脑内Aβ,并能在MRI上清楚地成像。股静脉注射是一种微侵袭的注射策略,便于以后对AD脑内Aβ的探测以进行纵向比较。关键词：阿尔茨海默病论文树突状细胞论文Aβ肽论文疫苗论文淀粉样蛋白论文阿尔茨海默病论文微型磁共振论文超小型顺磁性氧化铁颗粒论文乙二醇论文体素形态计量法论文
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第一部分英文摘要6-8
第二部分中文摘要8-10
第二部分英文摘要10-14
中英文缩略词汇表14-16
第一部分：突变型Aβ42刺激树突状细胞治疗AD转基因鼠作用机制的探讨16-40
前言16-21
探讨近况、成果16-20
探讨目的、策略20-21
材料与策略21-28
结果28-37
讨论37-39
小结39-40
第二部分：利用MRI通过USPIO-PEG-Aβ42探测AD转基因鼠脑中Aβ40-77
前言40-45
探讨近况、成果40-44
探讨目的、策略44-45
材料和策略45-55
结果55-73
讨论73-76
小结76-77
结论77-78
参考文献78-91
发表论文和参加科研情况说明91-92
综述92-99
阿尔茨海默氏病免疫治疗的探讨进展92-99
综述参考文献96-99
致谢99-100