阐述血吸虫日本血吸虫钙网蛋白克隆、表达及其免疫保护作用

论文导读：
摘要：目的：以日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA中扩增出日本血吸虫钙网蛋白(calreticupn, CRT)编码基因,克隆至原核表达载体,并表达出重组蛋白；制备重组日本血吸虫CRT (rSjCRT)蛋白质分子疫苗,观察疫苗在BALB/c小鼠中抗血吸虫感染的免疫保护作用。策略：提取日本血吸虫成虫总RNA,逆转录生成cDNA,然后以其为模板扩增出SjCRT编码基因,将扩增产物克隆入原核表达载体pET28a。在原核细胞表达rSjCRT蛋白。制备、纯化rSjCRT蛋白抗原,以50μg/100μl、100μg/100μl和200μg/100μl免疫BALB/c小鼠,观察它们的抗血吸虫感染作用；同时观察免疫前、感染前及剖杀前各组小鼠血清特异性IgG抗体。结果：PCR扩增出一具有1191bp完整开放读码框的DN段,成功地将其克隆入pET28a;将pET28a-SjCRT做BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片段；用IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3),可得到约45kDa的融合蛋白。融合蛋白可被血吸虫感染的兔血清识别。用SjCRT重组蛋白疫苗免疫BALB/c小鼠,1、2及3组诱导的减虫率分别为：23.98%,28.78%,35.06%；减卵率分别为：35.52%,40.24%,43.46%。间接ELISA结果显示,免疫前、感染前及剖杀前各组小鼠血清特异性IgG抗体逐渐升高。结论：本探讨成功地扩增、克隆和表达了SjCTR,基因工程疫苗免疫小鼠也获得了一定的免疫保护作用,表明SjCRT具有一定的抗血吸虫病潜能,有可能作为日本血吸虫病的候选疫苗分子。关键词：日本血吸虫论文钙网蛋白(CRT)论文克隆论文表达论文蛋白质疫苗论文血吸虫病论文
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中文摘要7-8
Abstract8-10
前言10-12
材料与策略12-30
实验材料12-16
实验策略16-30
日本血吸虫钙网蛋白(CRT)基因原核表达质粒的构建、鉴定16-23
重组SjCRT的表达纯化和鉴定23-27
rSjCRT蛋白质分子疫苗对小鼠免疫保护作用的观察27-30
统计学处理30
结果30-37
讨论37-40
结论40
参考文献40-43
个人介绍43-44
致谢44-45
综述45-53
参考文献50-53