浅析受体丙型病毒性肝炎母婴传播分子机制

论文导读：
摘要：导致丙型病毒性肝炎的致病因子是丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）。据世界卫生组织最新数据统计，全世界估计约1亿8千万人感染HCV。HCV感染的一个重要特点就是易致慢性化。但到目前为止，丙肝的预防仍无有效的策略。HCV在我国主要经血液或血制品传播，但近年来加强对献血员进行HCV筛检使输血后感染HCV大为降低。现已证实HCV有着母婴传播（mother-to-infant tranission, MIT），因而HCV母婴传播已成为探讨热点，但其具体传播分子机制目前尚不十分清楚。滋养层细胞是胎盘屏障的第一层细胞，HCV经胎盘感染胎儿必须突破此细胞层。已有探讨发现HCV病毒包膜糖蛋白E1/E2结合靶细胞表面受体后，病毒与靶细胞膜融合，引起靶细胞感染。母婴传播中HCV如何与靶细胞上受体结合的具体机制仍不清楚。由此深入探讨HCV的受体及相关辅受体，对了解HCV致病机制至关重要。探讨表明，树突状细胞（dendritic cell，DC）作为HCV转染细胞之一，其表面的树突状细胞特异性细胞间粘附分子-3结合非整合素因子即CLEL可与HCV的包膜糖蛋白E1/E2结合，介导病毒内化，感染靶细胞。在HCV母婴传播历程中是否也具有与以上病毒相似的分子机制，目前尚不完全清楚。为探讨在母婴传播中HCV如何与人滋养层细胞相互作用本探讨进行了如下工作：1、通过改良后的分离纯化法获得纯度较高的滋养层细胞，运用HCVRNA阳性血清进行体外感染，通过细胞裂解液裂解感染后细胞，经荧光RT-PCR技术检测感染后细胞培养上清和细胞内的HCV RNA，以观察HCV的感染及复制情况。经免疫荧光染色感染后48h滋养层细胞细胞浆中可见HCV NS5表达，分别于感染后24、48、72、96、120h收集的培养上清和感染后细胞内均可以检测到HCV RNA。HCV RNA阳性血清能在体外感染原代培养的人滋养层细胞，且HCV可在滋养层细胞中复制，为HCV母婴传播途径提供了形态学支持。2、免疫组化染色、免疫荧光策略观察CLEL在不同孕期胎盘绒毛组织及人滋养层细胞的定位与分布，为进一步探讨母婴传播分子机制提供细胞形态学基础。3、设CLEL单抗组、甘露聚糖组和对照组探讨CLEL介导HCV感染人胎盘滋养层细胞的情况。经RT-PCR法检测HCV感染后细胞内HCV RNA含量，结果显示CLEL4L单抗组细胞内HCV RNA水平较低，甘露聚糖组显示类似结果。可见CLEL能够介导HCV进入人胎盘滋养层细胞，CLEL单抗和甘露聚糖对HCV与人滋养层细胞的结合有一定阻断作用。关键词：CLEL论文丙型病毒性肝炎论文人滋养层细胞论文受体论文辅受体论文母婴传播论文分子机制论文
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中文摘要7-9
Abstract9-12
前言12-13
文献回顾13-29
实验

一、人滋养层细胞培养上清液及裂解液中丙型肝炎病毒检测29-40

1 材料29-32
2 策略32-34
3 结果34-38
4 讨论38-40
实验

二、CLEL 在人胎盘滋养层细胞的分布与定位探讨40-50

1 材料40-42
2 策略42-44
3 结果44-48
4 讨论48-50
实验

三、CLEL 介导 HCV 感染人胎盘滋养层细胞的探讨50-56

1 材料50-51
2 策略51-53
3 结果53-54
4 讨论54-56
小结56-57
参考文献57-73
个人简历和探讨成果73-74
致谢74