试述基质颌骨骨髓基质细胞与牙周膜干细胞生物学特性比较

论文导读：
摘要：牙周病(periodontal disease)是一种累及牙骨质、牙周膜和牙槽骨的慢性破坏性疾病，是造成成人牙齿脱落的主要病因。目前，组织工程是实现牙周再生最理想的方式。它包括三方面要素：种子细胞、支架材料和生长因子。合理选择种子细胞是其成功的关键[1]。牙周膜干细胞(PDLSCs)是目前公认的牙周组织再生最佳来源细胞[2],一定条件下可以构建功能性牙周膜[3-4]。但是，健康的牙周膜细胞需拔牙后分离培养获取，限制了其临床运用。由此，寻找其它种子细胞源也一直是国际相关热点之一。大量的探讨表明，来源于颌骨的骨髓基质细胞具有旺盛的增殖能力和优于髂骨来源的骨髓基质细胞的成骨特性。我们通过颌骨骨髓基质细胞(OF-MSCs)与牙周膜干细胞进行体内外比较，初步探讨颌骨骨髓基质细胞的生物学特性，探讨其用于牙周组织再生的可行性。本实验中通过颌骨骨髓基质细胞和牙周膜干细胞的原代培养，观察细胞外形及克隆形成情况；CCK-8测细胞生长曲线；免疫荧光染色检测STR0-1、CD146表达；定向诱导后检测脂滴形成及碱性磷酸酶活性变化情况，RT-PCR策略检测7、14d成骨相关基因的表达情况；扫描电镜观察两种细胞在HA/β-TCP材料表面的黏附、伸展情况，并植入裸鼠皮下(n=4)，8周后取材行组织学观察来评价两种细胞的成骨能力。结果：1、颌骨骨髓基质细胞和牙周膜干细胞体外原代培养均能贴壁生长，呈成纤维样细胞外形；颌骨骨髓基质细胞具有较强克隆形成能力；生长曲线显示两种细胞生长走势相似，颌骨骨髓基质细胞在6d左右基本进入平台期，牙周膜干细胞仍呈缓慢增加走势；两种细胞均表达间充质干细胞的表面标志STR0-1和血管旁标志CD146。2、两种细胞经成脂诱导14d，油红O染色可见脂滴形成；成骨诱导后RT-PCR均能检测到两种细胞均有成骨相关基因(OCN、OPN、ALP、runX2、BMP-2)的表达，其中OCN、OPN两种基因在颌骨骨髓基质细胞表达较早、较强；3、在非诱导条件下，颌骨骨髓基质细胞体现和牙周膜干细胞体现较低水平碱性磷酸酶活性，颌骨骨髓基质细胞稍强；在成骨诱导条件下，颌骨骨髓基质基质细胞碱性磷酸酶活性显著较牙周膜干细胞强；4、扫描电镜观察，两种细胞均可在HA/β-TCP材料表面黏附、伸展良好；5、植入裸鼠皮下8周，两种细胞可在HA/β-TCP表面形成类骨质样结构。结论：颌骨骨髓基质细胞与牙周膜干细胞体现相似，均具有间充质干细胞的一般特性，具有一定的体内成骨潜能，但体外具有比牙周膜干细胞更强的成骨向分化能力。其在牙周组织缺损修复中发挥什么样的作用，能否作为牙周组织工程中的种子细胞尚需进一步的探讨。关键词：颌骨论文人骨髓基质细胞论文人牙周膜干细胞论文潜能论文分化论文
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中文摘要8-10
Abstract10-13
前言13-15
文献回顾15-29
实验

一、颌骨骨髓基质细胞与牙周膜干细胞的基本生物学特性检测29-38

1 材料29-30
2 策略30-33
3 结果33-35
4 讨论35-38
实验

二、颌骨骨髓基质细胞与牙周膜干细胞多向分化能力的评价38-50

1 材料38-39
2 策略39-45
3 结果45-47
4 讨论47-50
实验三 颌骨骨髓基质细胞和牙周膜干细胞与 HA/Β-TCP 材料的体外黏附观察50-55
1 材料50-51
2 策略51
3 结果51-53
4 讨论53-55
实验

四、颌骨骨髓基质细胞与牙周膜干细胞的体内成骨潜能评价55-61

1 材料55-56
2 策略56-57
3 结果57-58
4 讨论58-61
小结61-62
参考文献62-72
附录72-78
个人简历和探讨成果78-79
致谢79-80