谈谈细胞因子活血化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠模型实验

论文导读：
摘要：目的：通过复制非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型并予以活血化痰方干预,探讨非酒精性脂肪肝可能的发病机制,探讨活血化痰方对NAFLD大鼠模型的干预、治疗的可能机制,为临床运用活血化痰方防治NAFLD提供实验依据。策略：健康雄性SD大鼠60只,体重130-150g,级别为清洁级,适应性饲养一周后,按体重编号,完全随机分为正常组(A组,10只)和高脂造模组60只。高脂饲料饲组又分为模型组(B组,20只),二甲双胍干预组(C组,10只),活血化痰方低剂量干预组(D组,10只),活血化痰方高剂量干预组(E组,10只)。自饲养第8周起,模型组每周随机处死1只大鼠,取肝脏HE染色确定B组大鼠达到重度脂肪肝后结束实验。实验历程中观察大鼠的一般情况,HE染色对肝脏脂肪变性程度及炎症程度进行分级、评分,全自动生化浅析仪检测血清中ALT、AST、TG、TC含量,免疫蛋白印迹检测法检测模型组及空白组大鼠肝组织中CBS、CSE蛋白水平的表达,检测血清、肝组织NO、 H2S水平,采取酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清瘦素、脂联素、IL-6、IL-10、TNF-α水平。结果：1.本实验16周成功复制了大鼠重度非酒精性脂肪性肝(NAFLD)模型。16周末时模型组大鼠体重显著高于正常组,(P0.01),B组大鼠肝重量显著高于A组(P0.05),B组大鼠肝指数显著高于A组(P0.01),与正常组相比,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平显著升(P0.05或P0.01),与A组相比,B组大鼠肝脏脂肪变程度显著增加(P0.01),与A组相比,B组大鼠肝脏炎症程度显著增加(P0.01),与A组比较,B组大鼠肝脏肝组织NO的含量显著增加,H2S含量显著减少,两组有显著性差别(P0.01),大鼠肝组织中CBS、CSE蛋白表达水平结果,B组与A组比较,CBS, CSE蛋白表达水平显著减低,两组均有显著性差别(P0.05)。与A组相比,B组大鼠血清NO水平显著升高(P0.01),与A组相比,B组大鼠血清H2S水平显著降低(P0.05),与A组相比,B组大鼠血清IL-6水平显著升高(P0.01),与A组相比,B组大鼠血清TNF-α水平显著升高(P0.05),与A组相比,B组大鼠血清IL-6水平显著升高(P0.01),与A组相比,B组大鼠血清TNF-α水平显著升高(P0.05)；与A组相比,B组大鼠血清瘦素含量显著升高(P0.01),脂联素含量显著降低(P0.05)。2.C、D、E组大鼠腹腔脂肪组织较模型组含量少,肝脏体积稍大,偏或暗红色,部分大鼠肝脏切面有油腻感。B组大鼠肝组织可见重度弥漫性肝细胞大泡性脂肪变,C、D、E组大鼠轻、中度肝细胞大泡性脂肪变,较模型组减轻,A组大鼠肝脏无显著炎性转变,B组肝脏炎性转变较显著,大量肝细胞肿胀伴有气球样变,部分小叶内有少量坏死灶,汇管区可见大量炎性细胞浸润并且向小叶内延伸,小部分有炎性细胞聚集,C、D、E组大鼠少量肝细胞肿胀伴气球样变,无显著小叶内有坏死灶,汇管区少许炎性细胞浸润,偶有有炎性细胞聚集,较B组显著减轻。3.与A组大鼠相比,B组肝组织中CBS、CSE蛋白表达水平显著降低(P0.05)；与B组相比,C、D、E组蛋白表达水平增高(P0.05,或P0.01),与C组相比,D、E组均无差别,D、E组之间无差别。与A组大鼠相比,B组肝组织中NO显著增高(P0.01),与B组相比,C、D、E干预组肝组织中NO降低(P0.05,或P0.01),与C组相比,D、E干预组之间均无差别；与A组相比,B组肝组织中H2S降低(P0.01),与B组相比,C、D、E组肝组织中H2S升高(P0.05,或P0.01),与C、D、E组均无差别,D、E组之间无差别；4.与A组大鼠相比,B组血清中ALT、AST、TG、TC显著增高(P0.01)；与B相比,C、D、E组血清中ALT、AST、TG、TC显著降低(P0.05,或P0.01)；与C组相比,D、E组均无差别,D、E组之间无差别。5.与A组大鼠相比,B血清中瘦素水平显著升高(P0.01)；与B组相比,C组、D组、E组血清中瘦素显著降低(P0.05,或P0.01)；与C组相比,E组无差别；与D组有显著差别；与A组大鼠相比,B组血清中脂联素水平显著降低(P0.01)；与B组相比,C组、D组、E组血清中脂联素水平显著升高(P0.05,或P0.01)；与C组相比,D组、E组无差别；D组、E组之间无差别6.血清中IL-6、IL-10、TNF-α的含量变化；血清IL-6水平与A组大鼠相比,B组显著升高,C组、D组、E组较模型组降低,但三者之间无显著差别；与A组比较,B组血清IL-10水平显著降低(P0.01)；与B组相比,C组、D组、E组血清中IL-10水平显著提升(P0.05,或P0.01),C组论文导读：801流行病学71-722脂质代谢72-733胰岛素抵抗734血脂代谢紊乱73-755氧化应激与脂质过氧化75-766脂肪因子76-777炎症因子77-788气体分子789环境、遗传基因因素78-80综述2活血化痰法治疗非酒精性脂肪肝的探讨进展80-881非酒精性脂肪肝的病因病机80-822活血化痰法的治疗进展82-872.1单味药的探讨83-852.2专方专药探
、E组较活D组提升显著；血清TNF-a水平与A组比较,B及D组显著增高(P0.01),C组、E剂量组较B组有显著降低；结论：1.高脂饲料喂养8周成功复制了大鼠单纯性脂肪肝(NAFL),16周功复制了大鼠重度非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型；2.活血化痰方有减少非酒精性脂肪性肝病大鼠血清TG、TC含量,有降低ALT、AST作用,可有效干预非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的形成；减少血清中IL-6、TNF-α的生成,推动血清中IL-10的生成,可显著减轻非酒精性脂肪性肝病中的炎症反应；3.脂联素、瘦素在脂肪肝的发病历程中起了重要作用,活血化痰方提升大鼠血清中脂联素、降低瘦素含量,防治非酒精性脂肪肝；4.高脂饲养脂肪肝的发病机制可能与H2S的生成有关,活血化痰方可显著提升CBS、CSE蛋白表达水平,调高血清中H2S浓度,延缓脂肪肝的进程。关键词：非酒精性脂肪肝论文硫化氢论文脂联素论文瘦素论文细胞因子论文活血化痰方论文
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Abstract9-14
英文缩写及中英文对照14-16
前言16-18
第一部分 活血化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠模型脂肪因子的影响18-36

1.1 实验材料18-19

1.1 实验药物与主要试剂18

1.2 实验仪器与设备18-19

1.3 实验动物19

1.2 实验策略19-23

1.2.1 饲料及配方19

1.2.2 实验分组19

1.2.3 实验给药19-20

1.2.4 一般情况的观察20

1.2.5 观察标本的采取20

1.2.6 肝组织病理学检查20-22

1.2.7 全自动生化浅析仪检测22

1.2.8 血清瘦素、脂联素水平的检测22-23

1.3 统计学策略23-24

1.4 实验结果24-29

1.4.1 一般情况及肝指数24

1.4.2 肝脏组织病理学检查24-26

1.4.3 各组大鼠血清中ALT、AST、TG、TC测定结果26-27

1.4.4 血清瘦素、脂联素水平的测定27-29

1.5 讨论29-36

第二部分 活血化痰方非酒精性脂肪肝大鼠模型炎症因子的影响36-45

2.1 实验材料36-37

2.

1.1 实验药物与主要试剂36

2.

1.2 实验仪器与设备36

2.

1.3 实验动物36-37

2.2 实验策略37-38

2.1 饲料及配方37

2.2 实验分组37

2.3 实验给药37

2.4 观察标本的采取37

2.5 采取双抗体夹心ABC-ELISA法检测37-38

2.3 统计学策略38-39

2.4 实验结果39-42

2.5 讨论42-45

第三部分 活血化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠H_2S生成及其生成酶CBS和CSE蛋白表达的影响45-59

3.1 实验材料45-46

3.

1.1 实验药物与主要试剂45

3.

1.2 实验仪器与设备45-46

3.

1.3 实验动物46

3.2 实验策略46-47
3.

2.1 饲料及配方46

3.

2.2 实验分组46

3.

2.3 实验给药46-47

3.

2.4 标本的采取47

3.3 标本检测47-52

3.1 BCA组织蛋白定量47

3.2 血清及肝脏NO、H_2S检测47-50

3.3.3 Western blot(免疫印迹法)检测肝脏CBS、CSE蛋白表达水平50-52

3.4 统计学策略52

3.5 实验结果52-57

3.5.1 血清及肝组织H_2S的水平52-53

3.5.2 血清及肝组织NO检测结果53-55

3.5.3 各组大鼠肝组织中CBS、CSE蛋白水平表达结果55-57

3.6 讨论57-59

结语59-63
参考文献63-71
综述71-98
综述1 非酒精性脂肪肝发病机制的探讨进展71-80
1 流行病学71-72
2 脂质代谢72-73
3 胰岛素抵抗73
4 血脂代谢紊乱73-75
5 氧化应激与脂质过氧化75-76
6 脂肪因子76-77
7 炎症因子77-78
8 气体分子78
9 环境、遗传基因因素78-80
综述2 活血化痰法治疗非酒精性脂肪肝的探讨进展80-88
1 非酒精性脂肪肝的病因病机80-82
2 活血化痰法的治疗进展82-87

2.1 单味药的探讨83-85

2.2 专方专药探讨85-87

3 讨论与展望87-88
参考文献88-98
致谢98