谈谈因子黄芪多糖丹参酮对心衰大鼠心肌NF-κB通路过度激活及MIF表达干预效应

论文导读：
摘要：目的建立心衰大鼠模型,通过以分子生物学和细胞因子网络调控系统的角度,初步探讨CHF时心肌中NF-κB信号转导通路过度激活的作用机制,浅析其与MIF、TNF-α、IL-6、TGF-β1等细胞因子的相关性；验证中药单体黄芪多糖联合丹参酮-IIA对NF-κB信号转导通路过度激活的阻断效应；并且以气虚血瘀证-免疫调节失衡-多层次多靶点的探讨角度,探讨益气活血中药对心衰大鼠的干预效应开发中药抗炎免疫调节有效成分,为临床治疗CHF降低心血管疾病的住院率探讨新思路、新策略。策略1.心力衰竭动物模型的制备：采取冠状动脉结扎术策略,经过第2周饲料减半,第3周游泳,第4周超声多普勒心电图,测定左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、射血分数(EF),计算左室心脏指数CI,建立心衰模型。2.分组与给药：将成模后大鼠纳入实验,分为黄芪多糖组(3g.kg-1.d-1,ig)、丹参酮组(5mg.kg-1.d-1,iv)、黄芪多糖+丹参酮组(剂量策略同上)、阿托伐他汀组(10mg.kg-1.d-1,ig)、模型组(等体积生理盐水,ig)、假手术组作为阴性对照(冠脉打虚结不结扎,以十二指肠予生理盐水,剂量策略同模型组),各用药组共干预6wk。3.观察心肌病理形态学变化：将大鼠采血处死,摘取心尖部心肌组织依次固定、脱水、石蜡包埋,行苏木精-伊红(HE)染色,光镜观察并评分4.免疫组织化学染色观察心肌组织NF-κB表达：采取图像浅析系统半定量浅析其表达量,并观察NF-κB激活时阳性表达核移位的情况。5.运用RT-PCR法检测心肌NF-κB和MIFmRNA含量的变化,并在此策略检测的基础上,加用荧光实时定量PCR法,测定目的基因基础量。6.采取Western blot法观察心肌NF-κB、IκB、IKK蛋白基因的表达,并采取LabWorks软件对图像进行灰度浅析。7.采取ELISA法测定血清MIF、TNF-α、IL-6及TGF-β1的水平,并浅析其相关性。8.运用SPSS17.0统计软件对数据进行浅析处理。结果1.超声心动图结果显示,在术后第4周,对成模组大鼠和假手术组大鼠分别进行心脏超声检测,成模组大鼠的左心室舒张末期内径(LVEDD).左心室舒张末期容积(LVEDV)和射血分数(EF)均显著低于假手术组大鼠(PO.01)。2.病理形态学观察发现,模型组大鼠心肌核萎缩,室壁局部不规则,有坏死灶形成,心肌纤维数量减少,心肌横纹变浅,由胶原纤维形成的疤痕组织取代部分坏死灶,结缔组织增生显著,有大量炎性细胞的浸润；各用药组室壁破坏程度降低,残余心肌细胞增加,横纹较清晰,可见疤痕组织及少量炎细胞；与假手术组相比,模型组大鼠病理积分显著增高(P0.05)；各用药组病理积分均显著下降,与模型组相比有显著性差别(P0.05)；黄芪多糖+丹参酮组病理积分最低,与模型组相比具有显著性差别(P0.05)。3.免疫组化定量浅析,结果显示心肌组织有着NF-κB不同程度的激活,与假手术组比较,模型组心肌组织NF-κB表达的阳性密度显著升高,差别有统计学作用(P0.05)；与模型组比较,各用药组的阳性密度均显著降低(P0.05)；配伍组的阳性密度与单一用药组相比,差别有统计学作用(P0.05)。4.RT-PCR法检测结果显示,模型组心肌NF-κB和MIFmRNA表达显著增高,各药物组对CHF大鼠心肌组织NF-κB和MIFmRNA表达有显著的抑制效应与假手术组相比,均具有显著性差别(P0.05)；黄芪多糖丹参酮配伍组的蛋白表达与黄芪多糖组、丹参酮组相比,差别具有显著性(P0.05)。5.荧光实时定量PCR法结果显示,心肌组织NF-κB和MIFmRNA目的基因基础量分别为：假手术组(1)、(1),阿托伐他汀组(1.239)、(1.109),黄芪多糖+丹参酮组(1.453)、(1.515),黄芪多糖组(1.777)、(1.777),丹参酮组(1.986)、(2.219),模型组(2.345)、(2.602),提示各用药组NF-κB和MIFmRNA表达均显著降低,与假手术组相比具有显著性差别(P0.05)；黄芪多糖丹参酮配伍组NF-κB和MIFmRNA表达与单一用药组相比,具有显著性差别(P0.05)。6.Western blot法检测心肌NF-κB、IκB、IKK的表达,结果显示：CHF模型组大鼠心肌组织NF-κB表达显著高于假手术组(P0.05)；各用药组NF-κB表达均比模型组减少(P0.05);配伍组NF-κB表达比单一用药组低(P0.05)；然而,模型组心肌组织IκB、IκK表达比假手术组低(P0.05)；各用药组IκB、IκK表达比模型组高(P0.05)；配伍组IκB、IκK表达与单一用药组相比,显著增加,差别具有统计学作用(P0.05)。7.ELISA法检测血清MIF、TNF-α、IL-6及TGF-β1表达的影响：模型组大鼠血清MIF、TNF-α、IL-6水平分别为(5.94±2.14)(420.36±67.57)(3704.44±1048.81),显著高于假手术组(0.23±0.08)(53.96±3.18)(352.40±87.20),均有显著性差别(PO.05)；各用药组血清MIF、TNF-α、IL=6水平较模型组均显著降低,有显著性差别(P0.05)；黄芪多糖丹参酮配伍组血清MIF、TNF-α、IL=6水平较单一用药组均显著降低,有显著性差别(P0.05)；而TGF-β1水平变化走势恰与之相反,模型组大鼠血清TGF-β1水平(50.84±10.21),显著低于假手术组(421.16±143.58),有显著性差别(P0.05)；各用药组血清TGF-β1水平与模型组相比均显著升高,差别有显著性(P0.05)；黄芪多糖丹参酮配伍组血清TGF-β1水平与单一用药组相比,显著增高,差别有统计学作用(PO.05)。8.CHF大鼠血清MIF水平与血清TNF-α、IL-6和TGF-β1的相关性浅析显示,血清MIF水平与血清TNF-α、论文导读：12-14文献综述一核因子-κB与心力衰竭14-241核因子-KB的分子结构与特点14-152NF-kB与心力衰竭的发生机制15-183抑制NF-kB的活化在心力衰竭治疗中的作用184展望18-19参考文献19-24文献综述二丹参治疗心血管疾病药理作用文献探讨24-321丹参单体的基础探讨24-272丹参制剂的临床运用27-283结语28-29参考文献29-32前言32
IL-6呈正相关(r1=0.879,r2=0.904,P0.01)；但是,TGF-β1与之走势相反,血清MIF水平与血清TGF-β1呈负相关(r3=-0.602,P0.01)。结论1.NF-κB作为信号传导途径中的枢纽,其激活途径主要与NF-κB由细胞质转运到细胞核内,同时伴随着抑制蛋白IKB及其最关键激酶IKK的降解呈负相关的密切联系,提示NF-κB信号转导通路在CHF发病中起重要作用。2.MIF在CHF大鼠血清和心肌组织中的表达均显著增加,并且血清MIF与TNF-α和IL-6呈正相关,而与血清TGF-β1呈负相关,提示MIF作为上游细胞因子在CHF发病中起着重要的免疫调节作用。3.黄芪多糖联合丹参酮-IIA的免疫调节治疗可纠正心衰大鼠的免疫状态调节炎症细胞因子与抗炎细胞因子间的平衡状态,具有显著的抗炎免疫调节活性,两者联用疗效优于单一用药组,对阻断大鼠心肌NF-κB转导通路过度激活及降低细胞因子MIF具有显著疗效,开发中药抗炎免疫有效成分的运用探讨前景广阔。关键词：黄芪多糖论文丹参酮论文核因子-κB论文巨噬细胞移动抑制因子论文心力衰竭论文免疫调控论文
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Abstract7-12
英文缩略语12-14
文献综述

一、核因子-κB与心力衰竭14-24

1 核因子-KB的分子结构与特点14-15
2 NF-kB与心力衰竭的发生机制15-18
3 抑制NF-kB的活化在心力衰竭治疗中的作用18
4 展望18-19
参考文献19-24
文献综述

二、丹参治疗心血管疾病药理作用文献探讨24-32

1 丹参单体的基础探讨24-27
2 丹参制剂的临床运用27-28
3 结语28-29
参考文献29-32
前言32-34
参考文献33-34
实验

一、黄芪多糖丹参酮对慢性心衰大鼠心肌NF-κB、MIF表达的调控作用34-58

材料与策略34-41
结果41-56
参考文献56-58
实验二 黄芪多糖丹参酮对心衰大鼠心肌NF-κB信号转导通路的激活及MIF免疫调节机制的影响58-86
材料与策略58-63
结果63-70
讨论70-78
结论78-80
参考文献80-86
附图86-90
致谢90-92
个人简历92-93