试议脾胃慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃粘膜蛋白质组学与三仁汤治疗实验中专

论文导读：
摘要：目的：探讨慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃粘膜的蛋白质表达，探讨慢性胃炎脾胃湿热证的相关发病机制，观察三仁汤治疗后慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃粘膜蛋白质的表达差别，探讨三仁汤治疗慢性胃炎脾胃湿热证的作用机制。策略：1、慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型的建立及三仁汤治疗的探讨：将36只SD雄性大鼠随机分为3组，即对照组、模型组、治疗组，每组12只。采取高糖高脂饮食、湿热环境、白酒及水杨酸钠等复合因素建立慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型。采取放免法检测各组大鼠血液胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)的含量，取胃窦部粘膜组织进行HE染色，观察各组大鼠胃粘膜炎症程度。2、慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃粘膜蛋白质组学及三仁汤治疗的探讨：分别提取对照组、模型组、治疗组胃粘膜组织总蛋白，采取双向凝胶电泳(2-DE)技术分离胃粘膜蛋白，考马斯亮蓝染色后，利用PDquest8.0软件对图像进行浅析，识别差别蛋白质点，运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF-MS）获得肽质量指纹图谱（PMF），选择8个峰进行二级质谱(MS/MS)，然后将一级和二级质谱数据整合并利用GPS3.6和Mascot2.1对质谱数据进行浅析和蛋白鉴定。结果：1、采取复合因素的策略成功建立慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型，以病理组织学观测到模型组大鼠胃粘膜炎症反应较显著，治疗组胃粘膜炎症反应显著减轻；模型组大鼠血液GAS、MTL含量较对照组、治疗组高，差别具有统计学作用（p＜0.05）。2、在相同条件下，初步建立了重复性好、分辨率高的对照组、模型组、治疗组大鼠胃粘膜双向凝胶电泳图谱。以对照组、模型组、治疗组凝胶图谱中检测到蛋白质斑点数分别为1025±39、994±51、1087±33个。经PDquest8.0软件浅析，模型组与对照组比较有差别表达蛋白质点74个，其中上调30个，下调44个，治疗组与模型组比较有差别表达蛋白质点75个，其中上调49个，下调26个。通过比较对照组、模型组、治疗组2-DE图谱的差别，选取差别表达最显著的5个蛋白质点进行质谱鉴定，鉴定结果为：热休克蛋白72、热休克蛋白60、苹果酸脱氢酶、蛋白质二硫键异构酶、未命名蛋白，它们的功能主要涉及分子伴侣和能量代谢。结论：采取高糖高脂饮食、湿热环境以及白酒、水杨酸钠等复合因素建立慢性胃炎脾胃湿热证模型是一种较为理想的造模策略。三仁汤能显著改善慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃粘膜炎症程度、临床症状及体征，以及降低慢性胃炎脾胃湿热证大鼠血液胃泌素、胃动素水平。成功建立了对照组、模型组及治疗组大鼠胃粘膜2-DE图谱，鉴定了5个差别表达蛋白质点。慢性胃炎脾胃湿热证发病机制可能与能量代谢障碍及应激反应有关，三仁汤治疗慢性胃炎脾胃湿热证的作用机制可能是通过调节胃粘膜蛋白质的差别表达。关键词：慢性胃炎论文脾胃湿热证论文蛋白质组论文三仁汤论文
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ABSTRACT5-10
英文缩写词10-12
前言12-14
第一部分 慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型的建立及三仁汤治疗的探讨14-21

1. 材料与策略14-17

1.1 实验材料14-15

1.2 实验策略15-17

2. 结果17-19

2.1 各组大鼠的主要症状及体征17

2.2 各组大鼠体重变化17-18

2.3 各组大鼠血液胃泌素、胃动素含量变化18

2.4 各组大鼠胃粘膜组织病理18-19

3. 小结19-21

第二部分 慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃粘膜蛋白质组学与三仁汤治疗的探讨21-33

1. 材料与策略21-26

1.1 实验材料21-22

1.2 实验策略22-26

2. 结果26-32

2.1 蛋白浓度测定结果26-27

2.2 各组胃粘膜双向凝胶电泳图谱27-28

2.3 蛋白质质谱鉴定和生物学功能28-32

3. 小结32-33

讨论33-41
1．蛋白质组学与中医药探讨的相关性33-34
2．慢性胃炎脾胃湿热证动物模型的建立与三仁汤治疗34-36
3．慢性胃炎脾胃湿热证胃肠激素的变化与三仁汤治疗36-37
4．慢性胃炎脾胃湿热证蛋白质差别表达与三仁汤治疗37-41
结论41-42
致谢42-43
参考文献43-47
攻读学位期间的探讨成果47-48
综述48-53
参考文献52-53