研究干细胞猪间充质干细胞生物学特点及其重编程为诱导多能干细胞

论文导读：46-503.1猪iPSCs的探讨近况和阻碍47-493.2小结49-50第二篇实验探讨50-116第1章体外长时间培养对猪间充质干细胞的增殖能力和分化潜能的影响50-721.1材料与策略51-621.2结果62-691.3讨论69-711.4小结71-72第2章重编程转录因子在不同代数猪间充质干细胞上的表达探讨72-92

2.1材料与策略72-752结果75-883讨论8

摘要：本探讨总结了猪间充质干细胞和诱导多能干细胞以及猪诱导多能干细胞的探讨进展，探讨了体外长期培养对猪脂肪间充质干细胞（Adipose mesenchyme stemcell, AMSC）和骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC）的增殖能力和多功能性基因表达的影响。探讨发现，AMSCs和BMSCs能在体外培养至第20代。随着培养代数的增加，AMSCs和BMSCs的增殖能力都有所下降，并且AMSCs的生长能力低于BMSCs。经过体外诱导分化实验证实，第20代的AMSCs和BMSCs依然具有分化为脂肪和骨细胞的能力。Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc和Nanog这五种重编程转录因子在各代数的猪间充质干细胞上均有表达。除了第20代的AMSCs，其余代数AMSCs表达Klf4的量高于相应代数的BMSCs，而任一代数BMSCs表达Oct4和Sox2的量也显著高于相应代数的AMSCs。经过蛋白定位发现，每种重编程转录因子在两种间充质干细胞的核与质中均有表达。本实验还探讨了AMSCs和BMSCs重编程到诱导多能干细胞（iPSCs）是否具有优越性，以及高代数AMSCs和BMSCs进行重编程的能力。探讨发现，当用第0代的AMSCs和BMSCs进行iPSCs诱导时，重编程速度和效率都显著高于猪胎儿成纤维细胞。第5代的AMSCs和BMSCs重编程速度和效率与第0代间充质干细胞相比，虽然有所下降，但差别不显著。当用第10代的AMSCs和BMSCs进行iPSCs诱导时，AMSCs没能形成克隆，BMSCs虽然形成了克隆，诱导速度和效率跟前两代的间充质干细胞相比不仅显著降低，获得的iPSCs质量也显著低于第0代和第5代细胞诱导的iPSCs克隆。外源基因检测结果显示本实验所获得的iPSCs克隆仍表达外源基因，细胞未被完全重编程，由此猪iPSCs诱导的条件和策略还需进一步改善。关键词：猪间充质干细胞论文猪诱导多能干细胞论文增殖能力论文分化潜能论文
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中文摘要5-8
Abstract8-14
前言14-16
第一篇 文献综述16-50
第1章 猪间充质干细胞的探讨进展和展望16-32

1.1 猪的间充质干细胞17-31

1.2 小结31-32

第2章 细胞重编程的历史、机制和运用32-46

2.1 多功能细胞系和融合杂交32-33

2.2 转录因子和细胞系的转变33-34

2.3 诱导多能性干细胞34-45

2.4 小结45-46

第3章 猪诱导多能干细胞的探讨进展46-50

3.1 猪 iPSCs 的探讨近况和阻碍47-49

3.2 小结49-50

第二篇 实验探讨50-116
第1章 体外长时间培养对猪间充质干细胞的增殖能力和分化潜能的影响50-72

1.1 材料与策略51-62

1.2 结果62-69

1.3 讨论69-71

1.4 小结71-72

第2章 重编程转录因子在不同代数猪间充质干细胞上的表达探讨72-92

2.1 材料与策略72-75

2.2 结果75-88

2.3 讨论88-90

2.4 小结90-92

第3章 利用特定转录因子对猪间充质干细胞进行重编程92-116

3.1 材料与策略92-103

3.2 结果103-112

3.3 讨论112-115

3.4 小结115-116

结论116-118
参考文献118-142
攻读学位期间发表的论文142-144
致谢144